AF633 C5 Maleimide，AF633 C5 马来酰亚胺的反应步骤
AF633 C5 Maleimide，AF633 C5 马来酰亚胺的反应步骤
AF633 C5 Maleimide 是一种荧光标记试剂，属于 Alexa Fluor 633 系列。其分子结构包括一个芳香环系统和一个 C5 连接的马来酰亚胺活性基团。马来酰亚胺基团能够与生物分子上的自由巯基（–SH）形成稳定的共价 thioether 键，实现特定蛋白质或小分子的标记。C5 代表染料与马来酰亚胺之间存在五个碳原子的间隔链，这种长度为标记后的分子提供了一定的空间柔性，减少对目标分子构象的干扰。AF633 的荧光激发波长约为 630 nm，发射波长约为 650–670 nm，可用于荧光成像和流式细胞分析。
AF633 C5 Maleimide 的反应基础是马来酰亚胺与巯基之间的 Michael 加成反应。在水溶液或缓冲体系中（pH 6.5–7.5 为适宜条件），马来酰亚胺环与巯基发生亲核攻击，形成稳定的 thioether 共价键。反应通常温和进行，不涉及高温或强酸碱环境，能够在保持蛋白质或小分子活性的同时完成标记。由于荧光染料为水溶性磺化化合物，其在生物体系中的溶解性较好，便于操作和后续实验。
典型反应步骤包括以下几个环节：
准备试剂与目标分子
取 AF633 C5 Maleimide 储备液（常用 DMSO 溶液）和待标记的含巯基蛋白质或小分子。目标分子需溶解于适宜缓冲液中，缓冲液应避免含有还原剂或自由巯基竞争物，以防影响标记效率。调节反应条件
调整溶液 pH 至 6.5–7.5，这一范围有利于巯基的亲核性和马来酰亚胺环的稳定性。温度通常控制在室温或轻微低温条件下，以减少蛋白质构象改变或降解。混合与反应
将 AF633 C5 Maleimide 溶液缓慢加入目标分子溶液中，并轻轻混匀。染料与巯基分子通过非共价吸引靠近，并随后发生 Michael 加成反应，形成稳定的共价 thioether 键。反应时间可根据目标分子浓度和染料比例调整，一般在 30 分钟至 2 小时范围内完成。反应终止与纯化
反应结束后，可通过透析、凝胶过滤或离心滤膜去除未反应的游离染料，以获得标记后的纯净分子。此步骤保证后续实验中荧光信号的可靠性，并减少背景干扰。验证与应用
标记后的分子可以通过荧光光谱、SDS-PAGE 或质谱等方法确认染料结合情况。AF633 标记的分子可以用于荧光显微镜成像、流式细胞术、蛋白质相互作用分析及其他生物检测实验。
产品名称：AF633 C5 Maleimide
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研
厂家：良林生物
产品目录
单磺基花菁染料CY7.5标记羧酸 CY7.5-Acid，mono-SO3， ICG-COOH 181934-09-8
凋亡靶向探针 ZnDPA-Cy7
凋亡靶向荧光探针ZnDPA-Cy3
凋亡靶向荧光探针ZnDPA-Cy3.5
仅用于科研，不能用于人体。小编axc