Alexa Fluor 488酪胺，AF488-TSA的反应原理
Alexa Fluor 488酪胺，AF488-TSA的反应原理
Alexa Fluor 488 酪胺（AF488-TSA）是一种常用的荧光标记试剂，主要应用于信号放大和荧光检测实验。其核心结构包括 Alexa Fluor 488 荧光团与酪胺（tyramine）衍生物，通过化学键连接形成可用于酶促标记的底物。Alexa Fluor 488 属于水溶性磺化荧光染料，激发波长约 495 nm，发射波长约 519 nm。荧光团稳定、亮度适中，结合酪胺后可参与酶催化反应，实现信号放大。
AF488-TSA 的反应原理依赖于 过氧化物酶（HRP, horseradish peroxidase）催化的自由基反应。酪胺分子在 HRP 存在下能够被过氧化氢氧化生成活性自由基中间体。这一自由基具有高度反应性，可以与附近的芳香族氨基酸（如酪氨酸残基）共价结合，从而将 Alexa Fluor 488 荧光团固定在目标蛋白或抗体附近。通过这种方式，单个酶分子可以催化多个荧光分子的沉积，实现信号放大效果。
具体反应步骤包括以下环节：
制备标记体系
AF488-TSA 通常以缓冲溶液稀释至适当浓度，并与经过二抗标记的 HRP 结合。目标分子或组织样品中已经结合有 HRP 的抗体作为催化点，确保荧光沉积局限于标记区域。自由基生成
在反应体系中加入低浓度过氧化氢（H₂O₂）后，HRP 催化酪胺氧化形成短寿命的自由基。Alexa Fluor 488 通过化学连接的酪胺部分与该自由基共价结合，使荧光团能够被固定在接近 HRP 的区域。自由基共价结合
酪胺自由基能够与蛋白质表面的酪氨酸或其他芳香族氨基酸形成共价键。由于自由基反应的快速性和局部性，荧光分子在目标区域快速沉积，提高信号强度。沉积后的荧光分子稳定存在，便于后续显微镜成像或定量分析。反应终止与清洗
为避免过度标记或非特异性结合，反应时间通常控制在几分钟至十几分钟。反应结束后，通过缓冲液清洗样品，去除未结合的 AF488-TSA。经过清洗，荧光信号主要来源于 HRP 附近的共价标记，从而实现信号的空间局限性和增强。信号检测与应用
标记完成后，可以使用荧光显微镜或多通道成像系统进行检测。AF488-TSA 由于近绿色发射波长，适合与其他荧光团进行多重标记。其信号增强能力使其在低丰度目标检测、组织切片分析和细胞成像中具有优势。
产品名称：Alexa Fluor 488酪胺
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研
厂家：良林生物
产品目录
凋亡靶向荧光探针ZnDPA-Cy5
凋亡靶向荧光探针ZnDPA-Cy5.5
凋亡靶向荧光探针ZnDPA-Cy7.5
凋亡靶向荧光探针ZnDPA-FITC
仅用于科研，不能用于人体。小编axc