Cy3 conjugate Streptavidin，红色荧光染料Cy3偶联链霉亲和素的合成过程研究

Cy3 conjugate Streptavidin，红色荧光染料Cy3偶联链霉亲和素的合成过程研究

Cy3 Conjugate Streptavidin 是将橙红色荧光染料 Cy3 与链霉亲和素（Streptavidin）共价偶联形成的标记分子，结合了高亮度荧光与生物素结合能力。该偶联物广泛应用于免疫检测、细胞成像、分子捕获和多通道荧光实验中。为了获得高效、稳定且功能完整的 Cy3 Streptavidin，合成过程研究是关键，包括偶联反应原理、条件优化和纯化策略。本文从化学原理和实验设计角度对 Cy3 Conjugate Streptavidin 的合成过程进行研究性描述。

Cy3 染料通常以 N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS ester）活化形式提供。NHS ester 的羧基活性通过酯化处理提高，可与蛋白质表面赖氨酸残基的氨基发生亲核加成反应，形成稳定的酰胺键。这一共价偶联是 Cy3 Streptavidin 合成的核心，保证荧光染料牢固附着在蛋白质上，同时避免在洗涤、固定或成像过程中脱落。该反应在温和的水性缓冲液中进行，通常选择 pH 7.4–8.5 的磷酸盐缓冲体系，以平衡酰胺键形成效率和蛋白质构象稳定性。

在合成过程研究中，反应摩尔比的优化尤为关键。Cy3 染料与 Streptavidin 的摩尔比直接影响染料负载数（Dye-to-Protein Ratio, D/P），过高比例可能导致蛋白质构象受损或空间阻碍，而过低比例则荧光信号不足。研究显示，通常选择 4–8 倍摩尔比染料过量，可在保持蛋白质活性的同时获得足够荧光强度。此外，反应时间与温度也是关键参数，室温条件下反应 1–2 小时通常能完成偶联，而低温可减少蛋白质变性风险。

偶联完成后，纯化是保证 Cy3 Streptavidin 功能性和信号稳定性的关键环节。常用方法包括凝胶过滤（gel filtration）、透析及亲和层析。凝胶过滤利用分子量差异将游离 Cy3 染料从蛋白质偶联物中分离，透析则通过半透膜去除小分子杂质。亲和层析可进一步去除失活或聚集的蛋白质，提高偶联产物纯度。纯化过程中需注意缓冲液 pH 和离子强度，以保持蛋白质构象和生物素结合能力。

表征是合成过程研究的重要部分。紫外-可见光谱（UV-Vis）可用于测定染料负载数，通过比较 Cy3 的吸收峰（约 550 nm）与蛋白质的 280 nm 吸收峰计算 D/P。荧光光谱确认荧光性能是否保持稳定，而 SDS-PAGE 结合荧光扫描可验证蛋白质完整性和染料附着情况。此外，功能性表征通过生物素化底物结合实验或免疫检测验证 Streptavidin 的生物学活性是否保留。

在实验研究中，还需关注偶联条件对蛋白质折叠、染料光稳定性及溶液稳定性的影响。加入缓冲剂、甘油或 BSA 可改善蛋白质稳定性，降低非特异性吸附。适当避光和低温处理则可防止 Cy3 光漂白，提高实验 reproducibility。

产品名称：Cy3 Conjugate Streptavidin 

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

产品目录

二磺酸基花菁染料CY3标记羧酸 diSulfo-Cy3-COOH 146397-17-3

二磺酸基花菁染料CY5标记马来酰亚胺 diSulfo-Cy5-MAL

二磺酸基花菁染料CY7标记双N-羟基琥珀酰亚胺酯 diSulfo-CY7-Bis-NHS

二磺酸吲哚菁绿标记N-羟基琥珀酰亚胺酯 disulfo-ICG-NHS

仅用于科研，不能用于人体。小编axc