Alexa Fluor 680 Streptavidin，Alexa Fluor 680标记链霉亲和素 的合成及纯化过程

Alexa Fluor 680 Streptavidin，Alexa Fluor 680标记链霉亲和素 的合成及纯化过程

Alexa Fluor 680 标记链霉亲和素（Alexa Fluor 680 Streptavidin）是一种将近红外荧光染料 Alexa Fluor 680（AF680）与链霉亲和素（Streptavidin）共价偶联形成的生物标记物，结合了高亮度荧光和生物素结合特性。在生物成像、免疫检测以及多通道荧光实验中广泛应用。其合成及纯化过程对于获得高纯度、功能完整且荧光稳定的偶联物至关重要。

合成 Alexa Fluor 680 Streptavidin 的第一步是选择合适的染料活性形式。AF680 通常以 N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS ester）形式提供，使其羧基能够与蛋白质赖氨酸的氨基反应形成稳定酰胺键。该共价偶联反应在温和水性缓冲体系中进行，常选用 pH 7.4–8.5 的磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液，以保证酰胺键形成效率，同时维持 Streptavidin 的天然构象和生物素结合活性。

偶联过程中，染料与蛋白质的摩尔比是关键参数。通常染料略过量（如 3–6 倍摩尔比）以确保足够负载，但过量染料可能引起蛋白质构象变化或染料自聚集，降低荧光效率。反应温度一般维持在室温至略低温度，以防蛋白质变性或荧光漂白，反应时间通常为 1–2 小时，确保 NHS ester 与赖氨酸氨基充分反应。

偶联完成后，需要进行纯化以去除未反应的自由染料、剩余活性酯及其他副产物。常用纯化方法包括凝胶过滤（gel filtration）、透析及亲和层析。凝胶过滤可根据分子量差异分离游离染料与蛋白偶联物，透析利用半透膜排除小分子杂质，而亲和层析则可进一步去除部分失活蛋白，保证产物功能完整。纯化过程中应选择适宜缓冲液（如 PBS 或 HEPES），并在低温避光条件下操作，以维护荧光稳定性和蛋白质活性。

纯化后的 Alexa Fluor 680 Streptavidin 需进行表征。首先，可通过紫外-可见光谱测定染料吸收峰（约 679 nm）和蛋白质 280 nm 吸收峰，计算染料负载数（Dye-to-Protein Ratio, D/P）。荧光光谱分析确认近红外荧光信号是否保持稳定，并与纯化前比较荧光强度和光谱特性。SDS-PAGE 结合荧光扫描可验证蛋白质完整性和染料结合情况。此外，通过生物素结合实验可评估 Streptavidin 的功能活性，确保偶联过程中蛋白质结合能力未受影响。

在整个合成及纯化过程中，操作条件对产物质量至关重要。缓冲液 pH、盐浓度和反应时间需精确控制，以保持蛋白质结构和荧光染料活性。适当添加稳定剂，如 BSA 或甘油，可降低蛋白质聚集和非特异性吸附。纯化后的产品在低温避光条件下储存，可长期保持荧光强度和生物活性。

产品名称：Alexa Fluor 680 标记链霉亲和素

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

产品目录

谷胱甘肽-聚乙二醇-谷胱甘肽，GSH-PEG-GSH，

还原型谷胱甘肽，L-Glutathione reduced?，科研试剂

花菁染料 Cy7标记，三磺酸盐， CY7-Acid，trisO3，

花菁染料 Cy7标记，双磺酸盐，双乙基， CY7-，DiSO3， Di Et，

花菁染料 CY7标记的溶菌酶 CY7-Lyticase，10U,ul，

仅用于科研，不能用于人体。小编axc