AF514 NHS Ester，AF 514琥珀酰亚胺酯的合成步骤

AF514 NHS Ester，AF 514琥珀酰亚胺酯的合成步骤

AF514 NHS Ester 中文名称为 Alexa Fluor 514 N‑羟基琥珀酰亚胺酯，亦可称 AF514 琥珀酰亚胺酯衍生物，是一种中波段荧光染料的活性衍生物，适用于蛋白质、肽链及小分子标记研究。Alexa Fluor 514 具有吸收峰约在 514 nm，发射峰约在 540 nm，荧光明亮且稳定，适合在多通道荧光成像和分子追踪实验中使用。NHS 酯衍生物通过羧酸活化提供可与氨基化合物反应的活性位点，实现共价偶联，从而将荧光染料稳定固定在生物分子上。

AF514 NHS Ester 的化学结构主要由三部分组成：Alexa Fluor 514 荧光核心、羧基功能及 NHS 活性酯。荧光核心是长 π 共轭体系，保证其吸收和发射光谱稳定，提供强荧光信号；羧基通过化学活化形成 NHS 酯，提供反应位点与氨基形成稳定酰胺键；NHS 酯结构在温和条件下反应高效，使染料能够与蛋白质、抗体或小分子实现共价结合。该结构设计兼顾荧光性能、水溶性和偶联活性，确保标记实验的可控性和高效性。

AF514 NHS Ester 的合成步骤可概括为三大环节：首先，将 Alexa Fluor 514 的羧酸衍生物作为起始物。羧基通过偶联剂如 DCC（N,N'-二环己基碳二亚胺）或 EDC（1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺）活化，生成 O‑酰化中间体。在无水溶剂（如 DMF 或 DCM）中进行反应，避光操作以防止染料降解。其次，将活化中间体与 N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）反应，生成 AF514 NHS Ester。该偶联反应通常在室温下进行，反应时间和温度可根据染料和溶剂性质调节，以保证产物生成和反应选择性。

反应完成后，生成的 AF514 NHS Ester 需进行纯化以去除未反应的起始物和副产物。常用纯化方法包括反相高效液相色谱（RP-HPLC）、硅胶柱层析或透析，纯化过程中可监测紫外吸收或荧光信号以确认产物。纯化后的染料通常通过冷干燥获得固体，并在低温避光条件下保存，以保证其荧光强度和化学稳定性。纯化后的产物可通过紫外-可见光谱和荧光光谱验证吸收峰和发射峰，并通过质谱或核磁共振进一步确认结构完整性。

AF514 NHS Ester 的化学特性表现为高反应选择性、水溶性好、荧光稳定性强以及标记后产物稳定。NHS 酯与氨基在中性至微碱性缓冲液中可快速反应形成稳定酰胺键，无需金属催化，条件温和，标记后的蛋白质或小分子在水相中保持长期稳定的荧光信号。此外，染料结构设计中通常包含柔性连接臂，使标记过程中对目标分子构象影响最小，同时保持荧光性能。

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产品名称：AF514 NHS Ester

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

厂家：良林生物

产品目录

花菁染料CY5标记a-酮戊二酸 CY5-α-KG 328-50-7

花菁染料CY5标记CAQK多肽；CY5-CAQK

花菁染料CY5标记CKAAKN多肽；CY5-CKAAKN

花菁染料CY5标记cRGDyK修饰的脂质体 CY5-cRGDyK-Liposome

花菁染料CY5标记CSTSMLKAC心肌靶向肽；CY5-CSTSMLKAC

仅用于科研，不能用于人体。小编axc