AF647 Concanavalin A,AF647 Con A的制备原理
产品名称:AF647 Concanavalin A,AF647 Con A的制备原理
1. 制备原理
偶联机制:AF647-NHS ester(N-羟基琥珀酰亚胺酯)与Con A的赖氨酸ε-氨基反应,形成稳定酰胺键。反应需在pH 7.2-8.0的PBS缓冲液中进行,避免游离胺/巯基竞争,通常染料与蛋白摩尔比2-5:1,确保荧光强度与生物活性平衡。
纯化与储存:通过透析、凝胶过滤去除游离染料,纯化产物需-20°C避光保存,含0.01-0.05%叠氮化钠或甘油防降解。商业化产品(如陕西新研博美生物科技)纯度≥95%,规格5-25mg,溶解于水或极性溶剂。
2. 应用场景
糖蛋白检测:结合Con A的糖结合特异性,标记细胞表面糖链(如淋巴细胞糖基化),通过荧光显微镜/流式细胞术分析糖基化模式,用于免疫学、肿瘤标志物研究。
纳米材料功能化:修饰纳米颗粒/脂质体表面,实现靶向递送(如药物载体),通过荧光追踪体内分布及内吞过程,评估靶向效率。
生物传感器:固定于金纳米颗粒或电极表面,构建SPR/电化学传感器,检测糖链或糖蛋白,应用于病原体表面糖结构分析、细胞芯片开发。
活体成像:远红外荧光特性减少组织自发荧光干扰,适合活体动物模型中糖蛋白动态追踪。
3. 实验注意事项
缓冲液条件:需含1mM Ca²⁺/Mn²⁺维持Con A活性,pH根据实验目的调整(如细胞刺激用中性pH,膜蛋白提取用酸性pH)。
浓度与时间:Con A对哺乳动物细胞有毒性,需优化浓度(通常10-50μg/mL)与作用时间(15-60分钟),避免过度激活或细胞损伤。
标记效率验证:通过紫外-可见分光光度法检测染料/蛋白摩尔比(D/P值2-5),或SDS-PAGE结合荧光扫描确认偶联情况,确保功能与荧光强度平衡。
储存与使用:避免反复冻融,复溶后分装保存,实验时避光操作以减少光漂白。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

关于我们:
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