Cy3 Tyramide，Cy3 酪胺偶联物的合成及纯化过程
Cy3 Tyramide，Cy3 酪胺偶联物的合成及纯化过程
Cy3 Tyramide，中文名称可表述为 Cy3 酪胺偶联物，是一种将 Cy3 荧光染料与酪胺（Tyramide）通过共价偶联形成的功能性分子。Cy3 是一种橙红色荧光染料，吸收峰约在 550 nm，发射峰约在 570 nm，具有高量子产率和良好光稳定性，常用于荧光标记和多色成像实验。酪胺偶联物在过氧化物酶（HRP）催化下可生成自由基中间体，在目标分子附近共价结合，实现 tyramide signal amplification（TSA）信号放大，适用于免疫组化和高灵敏度生物检测。Cy3 Tyramide 的合成及纯化过程涉及染料活化、偶联反应、粗分离及精制步骤，保证产物纯度、荧光性能和生物活性。
合成步骤概述：
荧光染料活化
Cy3 荧光染料通常以羧基形式提供，为与酪胺偶联，需要将羧基活化。最常用方法是将羧基转化为 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯，使羧碳具有高度亲电性。活化反应通常在干燥有机溶剂（如 DMSO、DMF）中进行，加入适量碱性催化剂（如二异丙基乙胺）促进生成活性中间体。活化后的 Cy3 NHS 酯是后续与酪胺伯氨基形成酰胺键的关键试剂。酪胺的准备与保护
酪胺分子含有伯氨基和酚羟基，偶联反应主要发生在伯氨基上。若酪胺分子上存在其他敏感官能团，需要采用保护基策略暂时保护，以防止副反应发生。保护基在偶联完成后可通过温和条件去除，恢复酪胺的全功能性。偶联反应
Cy3 NHS 酯与酪胺在缓冲液或有机-水混合溶剂中反应，伯氨基对羧碳进行亲核攻击，形成稳定的酰胺键。偶联反应一般在室温或略高温条件下进行，避光操作，以防止染料光漂白。反应时间通常为数小时至过夜，确保偶联效率和产物均一性。反应终止与粗分离
偶联反应完成后，体系中存在未反应的染料、未偶联的酪胺及副产物。通过透析或凝胶过滤（如 Sephadex G-25）初步去除小分子杂质和未反应染料，可获得粗纯化的 Cy3 Tyramide 偶联物。精制与纯化
为获得高纯度产物，可采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）精制。使用 C18 色谱柱，水-乙腈梯度体系分离，加入低浓度酸（如三氟乙酸或乙酸）改善峰形。通过荧光检测器监测流出峰，对应 Cy3 荧光信号的产物进行收集。HPLC 精制能够有效去除副产物和未偶联的染料，提高最终产物纯度和使用可靠性。去保护与产物稳定化
若偶联过程中使用了保护基，精制后进行去保护处理，恢复伯氨基和酚羟基功能。最终产物可冻干保存，在低温、避光条件下长期储存，以保证荧光性能和生物活性。产物表征与功能验证
纯化后，可通过 UV-Vis 光谱和荧光光谱验证偶联成功，吸收峰约在 550 nm，发射峰约在 570 nm。质谱（MALDI-TOF 或 ESI-MS）可确认分子量和偶联比例，HPLC 可检测纯度。功能验证可通过 HRP 催化的 TSA 实验，在细胞或组织样本中观察荧光信号增强效果，确保产物在实际生物应用中具有高活性和可视化效果。
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产品名称：Cy3 Tyramide
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研
厂家：良林生物
产品目录
花菁染料CY5.5标记鹅去氧胆酸 cy5.5-Glycochenodeoxycholic acid
花菁染料CY5.5标记二苯并环辛炔 Sulfo-CY5.5-DBCO 1857352-95-4
花菁染料CY5.5标记二氢卟吩 Cy5.5-Ce6
花菁染料CY5.5标记二油酰基磷脂酰乙醇胺 CY5.5-DOPE
仅用于科研，不能用于人体。小编axc