AlexaFluor647-MAL，AF647-马来酰亚胺的终止与纯化方法
AlexaFluor647-MAL，AF647-马来酰亚胺的终止与纯化方法
Alexa Fluor 647-MAL是一种荧光标记分子，由水溶性荧光染料Alexa Fluor 647（AF647）与马来酰亚胺（Maleimide, MAL）官能团通过化学连接形成。AF647具有吸收峰约650 nm、发射峰约668 nm的特性，荧光信号强、光漂白性低，且水溶性良好。马来酰亚胺是一种亲电子官能团，可与含巯基（–SH）的分子特异性反应，形成稳定的硫醚键。这种选择性使AF647-MAL成为蛋白质、肽、多肽及其他含巯基分子的高效荧光标记工具，广泛应用于生物实验、分子探测和载体追踪。
化学特性与反应原理
AF647-MAL分子主要由三部分组成：荧光染料主体、柔性连接链和马来酰亚胺活性基团。马来酰亚胺为α,β-不饱和酰亚胺结构，能够被巯基进行亲核加成，形成稳定的碳硫单键（硫醚键）。该反应具有高度选择性，在温和条件下即可进行，无需催化剂，同时对蛋白质或多肽的其他官能团干扰较小，因此适用于生物分子标记及载体功能化。荧光染料通过柔性链连接于马来酰亚胺端，使标记反应与荧光性能相互独立，保证标记分子在实验体系中的可视化和稳定性。
反应条件
缓冲液选择
马来酰亚胺与巯基反应的最佳pH范围为6.5–7.5。通常使用PBS、Hepes或磷酸盐缓冲液，不含胺类（如Tris）或还原剂（如DTT、β-巯基乙醇），以避免非特异性竞争反应。缓冲液应保持中性或略偏碱性，以优化巯基的亲核性并保持蛋白质或多肽的稳定性。巯基预处理
对蛋白质或多肽进行标记前，巯基通常需要暴露或还原。对于二硫键闭合的分子，可使用轻度还原剂（如TCEP）在温和条件下将二硫键还原为自由巯基。此步骤必须控制反应时间和还原剂浓度，以避免破坏蛋白质结构。反应温度
反应通常在室温或轻微低温（20–25℃）下进行，以保护生物分子的结构和功能。过高温度可能导致蛋白质变性或荧光团降解，而过低温度则可能降低反应速率。反应时间与摩尔比
AF647-MAL与巯基分子的摩尔比可调节标记密度，一般为1:1至5:1。反应时间通常为30分钟至2小时，根据巯基暴露程度和分子大小而定。反应速度较快，可在温和条件下完成高效率标记。终止与纯化
反应完成后，剩余未反应的AF647-MAL可通过加入低浓度巯基化合物（如甘氨酸或cysteine）终止。随后采用透析、凝胶过滤或分子筛柱纯化产物，去除多余染料和副产物，得到高纯度标记分子。
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产品名称：Alexa Fluor 647-MAL
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研
厂家：良林生物
产品目录
CY2-Schaftoside CY2标记夏佛塔苷
Cy2-SE (iodine)
CY2-sucrose CY2标记蔗糖
CY2-UrolithinA CY2尿石素A
CY2-Zingibroside R1 CY2标记姜状三七苷R1
仅用于科研，不能用于人体。小编axc