Cy3.5-Shrimp-tropomyosin，CY3.5标记虾原肌球蛋白的合成及纯化过程

Cy3.5-Shrimp-tropomyosin，CY3.5标记虾原肌球蛋白的合成及纯化过程

Cy3.5-Shrimp-tropomyosin 是将花菁染料 Cy3.5 共价标记在虾来源原肌球蛋白（Shrimp Tropomyosin, STPM）分子上的衍生物，将远红荧光功能与蛋白质的生物学特性结合，为免疫学研究、分子示踪及过敏原分析提供多功能工具。虾原肌球蛋白是一种高分子量蛋白，呈 α-螺旋结构，含有丰富的赖氨酸、半胱氨酸和羧基残基，提供多种化学修饰位点。Cy3.5 的远红荧光特性（吸收峰约 570–580 nm，发射峰约 590–620 nm）使标记后的蛋白能够在体外实验和生物分析中实现高灵敏度可视化。

Cy3.5-Shrimp-tropomyosin 的合成主要依赖蛋白氨基或半胱氨酸残基与 Cy3.5 活性基团的共价偶联。常用方法是采用 Cy3.5-NHS 酯或 Cy3.5-maleimide 对蛋白表面可反应氨基或巯基进行标记。对于赖氨酸残基，Cy3.5-NHS 与蛋白氨基发生亲核取代反应，形成稳定的酰胺键。反应机理为 Cy3.5 的活化羧基（NHS 酯）作为亲电中心，蛋白氨基孤对电子攻击形成中间过渡态，随后离去基团脱离完成共价偶联。对于半胱氨酸残基，则可使用 Cy3.5-maleimide，通过 Michael 加成形成稳定的硫醚键。

反应条件通常在温和缓冲体系中进行（pH 7–8，室温至 25°C），以保证蛋白质构象稳定，同时避免 Cy3.5 荧光团降解。缓冲液中不含初级胺或巯基的干扰物质，以提高偶联效率。标记摩尔比可通过 Cy3.5 与蛋白的比例调控，确保高偶联效率而不影响蛋白活性或导致分子聚集。反应时间一般为 1–4 小时，根据蛋白浓度和目标标记度进行优化。

偶联完成后，需要对产物进行纯化，以去除未反应的 Cy3.5 荧光团和副产物。常用纯化方法包括透析、凝胶过滤（Sephadex G-25 或 G-50）以及超滤。透析和超滤可以根据分子量差异将小分子 Cy3.5 彻底去除，而保持高分子量蛋白链完整。凝胶过滤不仅可去除小分子杂质，还能实现缓冲液交换，为下游实验提供适宜环境。

纯化后的 Cy3.5-Shrimp-tropomyosin 通常通过紫外-可见光谱（UV-Vis）和荧光光谱进行表征，确认荧光信号和偶联效率。UV-Vis 光谱显示 Cy3.5 的特征吸收峰，而荧光光谱可验证远红发射强度及稳定性。此外，可通过 SDS-PAGE 结合荧光成像评估标记均一性，确保蛋白未发生降解或聚集。蛋白浓度和偶联比可通过比色法或光密度测定进行定量分析，保证实验可重复性。

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产品名称：Cy3.5-Shrimp-tropomyosin

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

厂家：良林生物

产品目录

水溶性花菁染料CY5.5标记二苯并环辛炔 Sulfo-cy5.5-DBCO 1857352-95-4

水溶性花菁染料CY5.5标记马来酰亚胺 Sulfo-Cy5.5-Mal 2183440-58-4

水溶性花菁染料Cy5.5标记炔烃 Sulfo-CY5.5-alkyne 2055046-12-1

水溶性花菁染料CY5.5标记羧酸 Sulfo-CY5.5-COOH 210892-23-2

水溶性花菁染料CY5.5标记羧酸 Sulfo-Cy5.5-COOH 2183440-68-6

仅用于科研，不能用于人体。小编axc