CY3-Concanavalin-A，CY3标记的刀豆蛋白A的合成步骤

CY3-Concanavalin-A，CY3标记的刀豆蛋白A的合成步骤

CY3-Concanavalin-A（CY3 标记的刀豆蛋白 A，ConA）是通过将刀豆蛋白 A 分子与 Cy3 荧光染料共价连接形成的标记体系，用于糖蛋白研究、细胞膜受体分析以及荧光可视化实验。ConA 是一种植物来源的凝集素，分子量约 26 kDa，含有多个糖结合位点，能够特异性识别 α-D-甘露糖和 α-D-葡萄糖残基，在细胞黏附、信号转导及糖蛋白分析中具有广泛应用。Cy3 为三甲烯型花菁染料，由两个氮杂芳香环通过多甲烯链形成刚性 π 共轭体系，吸收峰约 550 nm，发射峰约 570 nm，为 ConA 提供可视化荧光信号，实现分子追踪和定量分析。

CY3-ConA 的合成步骤主要包括以下几个环节：

第一步：蛋白准备
选择高纯度的刀豆蛋白 A，并在温和缓冲液（如 PBS, pH 7.4–8.0）中溶解，保持蛋白结构稳定。蛋白浓度通常控制在适中范围，以保证标记反应均匀进行，同时避免糖结合位点受损。

第二步：Cy3 荧光染料活化
常用 Cy3-NHS 酯作为活化形式，在干燥有机溶剂（如 DMSO）中溶解并避光保存。NHS 酯可与蛋白上的赖氨酸氨基或 N 端氨基发生亲核加成反应，形成稳定酰胺键。

第三步：荧光标记反应
将 Cy3-NHS 酯缓慢加入 ConA 蛋白溶液中，在弱碱性条件下（pH 7.5–8.5）反应，一般在室温下持续 1–2 小时。荧光团通过柔性连接臂与蛋白的赖氨酸氨基共价结合，尽量避免占据糖结合位点，保证标记后 ConA 的糖结合功能和空间构象不受干扰。反应过程中，可轻轻搅拌以促进均匀反应，同时控制染料与蛋白摩尔比以调节标记度。

第四步：产物纯化
反应完成后，通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）去除未反应的 Cy3 分子及副产物，得到纯净的 CY3-ConA。纯化保证标记蛋白在水溶液中分散均匀、荧光信号稳定，并减少自由染料对实验的干扰。

第五步：性能验证
纯化后的 CY3-ConA 通过光谱分析验证光学特性，确认吸收峰和发射峰稳定；通过糖结合实验或细胞黏附测试评估标记后蛋白活性是否保持；可通过 SDS-PAGE 和动态光散射（DLS）检测蛋白分子大小及均一性。标记度适中时，荧光强度与蛋白浓度呈线性变化，可用于定量分析。

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产品名称：CY3-Concanavalin-A

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

厂家：良林生物

产品目录

CY7-Doxorubicin CY7阿霉素

CY7-Ellagic acid CY7标记鞣花酸

CY7-Enrofloxacin CY7标记恩诺沙星

CY7-Fibrinogen CY7标记纤维蛋白原

CY7-Fucoidan CY7褐藻糖胶岩藻多糖

仅用于科研，不能用于人体。小编axc