Cy3-ConA，CY3标记的刀豆蛋白A的制备方法

Cy3-ConA，CY3标记的刀豆蛋白A的制备方法

Cy3-ConA（CY3 标记的刀豆蛋白 A，Concanavalin A）是将刀豆蛋白 A 分子通过化学方法共价连接 Cy3 荧光染料形成的标记体系，用于糖蛋白研究、细胞膜受体分析以及荧光可视化实验。刀豆蛋白 A 是一种植物凝集素，分子量约 26 kDa，具有多个特异性结合 α-D-甘露糖和 α-D-葡萄糖残基的糖结合位点，可识别并结合细胞表面糖链，广泛应用于细胞黏附、信号传导及糖蛋白识别研究。Cy3 为三甲烯型花菁染料，由两个氮杂芳香环通过多甲烯链形成刚性 π 共轭结构，吸收峰约 550 nm，发射峰约 570 nm，为 ConA 提供稳定荧光信号，实现可视化追踪和定量分析。

CY3-ConA 的制备方法主要包括以下几个关键步骤：

第一步：ConA 蛋白准备
选用高纯度的刀豆蛋白 A，并在缓冲液（如 PBS, pH 7.4–8.0）中溶解，保持蛋白结构稳定。为防止糖结合位点受损，可在温和条件下操作，并控制蛋白浓度和 pH 值，以保证蛋白的天然构象和活性。

第二步：Cy3 活化染料准备
常用 Cy3-NHS 酯作为活化形式，溶解于干燥有机溶剂（如 DMSO），保持避光条件以防光降解。Cy3-NHS 酯可与蛋白赖氨酸氨基发生亲核加成反应，形成稳定酰胺键。

第三步：荧光标记反应
将 Cy3-NHS 酯缓慢加入 ConA 蛋白溶液中，在弱碱性缓冲条件下（pH 7.5–8.5）反应，一般在室温下反应 1–2 小时。此过程中，Cy3 分子通过柔性连接臂与蛋白上的赖氨酸氨基共价结合，避免占据糖结合活性位点，保证标记后 ConA 的糖结合功能和三维结构基本保持不变。

第四步：产物纯化
反应完成后，采用透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）方法去除未反应的 Cy3 分子和副产物，得到纯净的 CY3-ConA。纯化步骤能够保证荧光信号稳定，避免自由染料干扰实验结果。

第五步：性能验证
纯化后的 CY3-ConA 可通过紫外-可见光谱和荧光光谱检测其光学特性，确认吸收峰和发射峰稳定；通过结合实验（如糖结合测试或细胞黏附实验）验证其糖结合功能是否保留；同时可通过 SDS-PAGE 和动态光散射（DLS）分析蛋白分子大小及均一性。

CY3-ConA 制备方法的特点在于温和条件、高选择性和可控性。标记过程中，通过调节 Cy3 与 ConA 的摩尔比、反应时间和温度，可以控制标记度，实现荧光强度与蛋白功能的平衡。柔性连接臂设计可减少荧光淬灭和蛋白聚集，使 CY3-ConA 在水溶液和生物体系中保持稳定性。

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产品名称：Cy3-ConA，CY3标记的刀豆蛋白A

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

厂家：良林生物

产品目录

CY7-D-Alanine CY7标记D-丙氨酸

CY7-Daunorubicin CY7柔红霉素

CY7-DBCO  CY7标记二苯基环辛炔

CY7-Deoxycholic acid CY7标记脱氧胆酸

CY7-D-Glutamic Acid CY7标记D-谷氨酸

仅用于科研，不能用于人体。小编axc