OG488-NHS酯的核心定义与结构特性,198139-51-4
产品名称:OG488-NHS酯的核心定义与结构特性,198139-51-4
1. 核心定义与结构特性
化学本质:基于荧光素衍生物的绿色荧光染料,全称Oregon Green 488琥珀酰亚胺酯(OG488-NHS),分子式为C₂₅H₁₃F₂NO₉,分子量约509.37 g/mol。其核心结构由Oregon Green 488荧光团(含双氟原子提升光稳定性)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯组成,后者通过共价键连接荧光团,实现与生物分子(如蛋白质、抗体、肽、核酸)的氨基反应。
光谱特性:激发波长492-496 nm,发射波长515-524 nm(绿光范围),消光系数76,000 M⁻¹cm⁻¹,斯托克斯位移约20 nm,光稳定性显著优于传统荧光素(如FITC),且pKa≈4.6-4.8,在生理pH(4-9)范围内荧光信号稳定,对酸性环境(如溶酶体)成像具优势。
反应机理:NHS酯在弱碱性条件(pH 8.3-9.0)下与生物分子伯氨基(-NH₂)发生亲核取代,形成稳定酰胺键(-CO-NH-),释放N-羟基琥珀酰亚胺,实现荧光标记。
2. 关键应用场景
蛋白质与抗体标记:用于免疫荧光、流式细胞术、Western blot等,标记抗体后追踪抗原分布(如细胞表面受体、肿瘤标志物)。例如,标记IgG抗体用于细胞免疫荧光成像,或标记链霉亲和素构建生物素-亲和素放大系统。
细胞成像与动态追踪:活细胞内标记蛋白质(如转运蛋白、信号分子),实时观察其动态变化(如胞吞、胞吐、信号传递)。结合共聚焦/STED超分辨显微镜,可解析细胞器(如高尔基体、内质网)的精细结构。
多色荧光共定位:与红色(如Alexa Fluor 568)、蓝色(如DAPI)荧光染料联用,实现多通道共定位实验(如细胞分型、凋亡检测),光谱重叠度低,兼容复杂多色成像。
荧光pH指示:作为pH敏感探针,监测酸性细胞器(如溶酶体、内体)或微环境的pH变化,揭示细胞内代谢或病理过程。
3. 技术优势与注意事项
优势:
高光稳定性:抗光漂白能力强,适合长时间动态成像(如延时实验)。
低pH依赖性:生理pH范围内荧光稳定,减少环境酸碱度对信号的影响。
生物相容性:葡聚糖载体对细胞无干扰,降解缓慢,适合长期实验。
多色兼容性:绿光发射与红/蓝荧光染料无缝搭配,适配多色实验需求。
注意事项:
储存条件:避光、-20℃以下冰冻保存,避免反复冻融;溶液分装后4℃保存不超过2周,添加5 mM叠氮钠防腐。
操作优化:需在弱碱性缓冲液(如100 mM碳酸氢钠,pH 8.3)中反应,染料与生物分子摩尔比建议4:1至10:1,室温避光反应1小时,后通过凝胶过滤(如Sephadex G-25)或透析纯化。
光谱验证:多色标记前需确认光谱兼容性,避免与FITC/Alexa Fluor系列重叠。
安全提示:仅供科研使用,不可用于临床或诊疗;操作时需佩戴防护装备,避免接触皮肤或吸入。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

关于我们:
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