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生物素PSMA,Biotin-PSMA的合成及纯化过程

2025-12-29 分享

生物素PSMA,Biotin-PSMA的合成及纯化过程

中文名称:生物素标记前列腺特异性膜抗原
(亦称:生物素-PSMA、Biotin-PSMA 偶联物)

英文名称:Biotin-PSMA
(Biotinylated Prostate-Specific Membrane Antigen)

合成及纯化过程:
Biotin-PSMA 是一种功能化分子,将生物素(Biotin)共价偶联到前列腺特异性膜抗原(PSMA)配体或抗体上,用于生物检测、靶向成像及药物递送体系研究。其设计结合了生物素的高亲和力与 PSMA 的靶向特性,使偶联物在链霉亲和素介导体系中具有特异性识别能力。

合成过程:

  1. PSMA 配体或抗体准备
    根据应用选择小分子配体或单克隆抗体形式的 PSMA。若为抗体,需在温和缓冲体系中保持蛋白结构和活性。若为小分子配体,通常包含可与生物素偶联的活性氨基或羧基官能团。

  2. 生物素活化
    生物素通常以 NHS 酯(Biotin-NHS)或其他活化形式存在,通过活化羧基可高效与氨基发生酰胺化反应。活化过程在有机溶剂或缓冲体系中进行(如 PBS,pH 7.2–7.5),保证生物素活性和偶联效率。

  3. 偶联反应
    将活化的生物素与 PSMA 分子混合,反应条件温和(室温或低温),在缓冲液中进行 1–4 小时。反应过程中,PSMA 的氨基攻击生物素 NHS 酯的碳酰碳,生成稳定的酰胺键,将生物素固定到分子上。偶联比例可通过摩尔比控制,以保证靶向能力和生物素数量均衡。

  4. 反应终止与缓冲调整
    偶联完成后,加入甘氨酸或 Tris 缓冲液封闭未反应的 NHS 酯,防止非特异性偶联。缓冲体系可调至中性或弱碱性,以保护蛋白质或小分子配体活性。

纯化过程:

  1. 透析或凝胶过滤
    对抗体型 Biotin-PSMA,可通过透析或凝胶过滤去除未反应的生物素、低分子杂质及副产物,获得高纯度偶联物。

  2. 高效液相色谱(HPLC)纯化
    小分子配体偶联的 Biotin-PSMA 可采用反相 HPLC 纯化,通过梯度洗脱分离目标产物与副产物,收集纯化峰。

  3. 纯度与结构验证

    • 质谱(MS):确认偶联后的分子量与理论值一致。

    • 紫外/可见光谱(UV/Vis):生物素特征吸收峰检测偶联效果。

    • SDS-PAGE 或 HPLC 分析:抗体型产物用于纯度评估和条带可视化。

应用优势

  • 可通过链霉亲和素体系实现靶向检测与信号放大。

  • 保持 PSMA 配体或抗体的靶向能力,同时提供可追踪的生物素标签。

  • 适用于 ELISA、流式细胞术、免疫荧光及成像研究。

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Biotin-PSMA

纯度:95%+

规格:mg/g

用途:科研

厂家:良林生物

产品目录

Cy5标记盐酸拓扑替康

Cy5-Topotecan-hydrochloride

Cy5标记药物rhCNB

Cy5-药物rhCNB

CY5标记伊维菌素

CY5-Ivermectin

CY5标记胰岛素

仅用于科研,不能用于人体。小编axc