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DNP-HSA,二硝基苯基-人血清白蛋白的反应条件

2026-01-04 分享

DNP-HSA,二硝基苯基-人血清白蛋白的反应条件

中文名称:二硝基苯基-人血清白蛋白(DNP-HSA)
英文名称:Dinitrophenyl–Human Serum Albumin (DNP-HSA)

DNP-HSA 是一种通过共价偶联将二硝基苯基(DNP, 2,4-或2,6-二硝基苯基)基团修饰到人血清白蛋白(HSA)上的化学试剂。DNP 作为小分子抗原,可以引入蛋白表面,实现免疫反应研究、抗体特异性分析及免疫识别实验。HSA 作为载体蛋白,具有良好的水溶性、结构稳定性和丰富的氨基残基,便于与 DNP 形成稳定共价结合。

反应条件:

  1. 反应机理
    DNP 通常以活性化学衍生物(如 DNP-NHS 酯或 DNP-碳酸酯)形式与 HSA 的赖氨酸氨基残基发生酰胺化反应,形成稳定的 DNP-HSA 共轭物。该反应通过蛋白氨基的亲核攻击完成,通常在温和缓冲条件下进行,以保持蛋白活性。

  2. 缓冲体系与 pH
    偶联反应多在 pH 7.2–8.5 的磷酸盐或碳酸盐缓冲液中进行。适宜的 pH 条件既能维持蛋白质稳定性,又保证 NHS 酯或活性 DNP 充分反应。

  3. 反应温度与时间
    反应通常在室温下进行,避免高温导致蛋白变性。反应时间一般为 1–4 小时,可通过取样分析偶联效率。过长反应时间可能增加蛋白非特异性修饰或降解风险。

  4. 底物比例与浓度
    DNP 与 HSA 的摩尔比通常在 5–20:1 范围,根据所需修饰度调节。DNP 过量可提高修饰率,但需在反应后通过透析或凝胶过滤去除未反应的 DNP,以保证纯化产物稳定。

  5. 纯化与储存
    偶联完成后,通过透析、凝胶过滤或超滤去除游离 DNP,得到均匀的 DNP-HSA 产物。纯化后的 DNP-HSA 可溶于缓冲液,通常储存在 4 ℃ 下,避免反复冻融,以保持蛋白结构稳定和抗原功能完整。

  6. 应用提示
    DNP-HSA 可用于抗体特异性检测、免疫学实验及抗原-抗体相互作用研究。通过调节偶联比例,可控制 DNP 在 HSA 表面的密度,优化免疫反应敏感性。

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DNP-HSA

纯度:95%+

规格:mg/g

用途:科研

厂家:良林生物

产品目录

HA50K-CY5

HA5K-FITC

Hemin-NHS

HO-PEG5000-NHS

HS-PEG1000-COOH

ICG,吲哚菁绿

Igepal co-520

仅用于科研,不能用于人体。小编axc