FITC-SPA，FITC标记金黄色葡萄球菌的制备工艺与反应机制

产品名称：FITC-SPA，FITC标记金黄色葡萄球菌的制备工艺与反应机制

一、核心概念与化学设计

FITC（异硫氰酸荧光素）：激发波长495 nm，发射波长525 nm，量子产率高（约0.9），光稳定性良好，适用于荧光显微镜、流式细胞术及多色成像。其异硫氰酸基（-N=C=S）可与生物分子（如蛋白质氨基）共价结合，形成稳定硫脲键。

SPA（金黄色葡萄球菌蛋白A）：分子量约42 kDa，含5个IgG Fc结合结构域，可特异性结合人/哺乳动物IgG的Fc段，广泛用于免疫沉淀、免疫荧光、抗体纯化及病原体检测。

FITC-SPA复合物：通过化学偶联将FITC标记于SPA的氨基/巯基位点，形成荧光标记蛋白A，保留Fc结合能力的同时赋予荧光可视化特性，适用于活细胞/体内追踪、高通量筛选及生物传感器构建。

二、制备工艺与反应机制

标记策略

直接偶联法：FITC在弱碱性（pH 8.5-9.5）条件下与SPA的赖氨酸残基氨基反应，形成硫脲键。反应需避光、低温（4℃）进行，避免荧光淬灭或蛋白变性。

活化酯法：FITC先与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）反应生成活性酯，再与SPA氨基偶联，提高反应效率与特异性。

点击化学法：通过炔基/叠氮基团与FITC的生物正交反应（如CuAAC），实现精准标记，减少非特异性结合。

纯化与表征

纯化技术：采用凝胶过滤层析（如Sephadex G-25）、离子交换层析或透析去除游离FITC，确保标记率（FITC/SPA摩尔比1:1-3:1）与纯度（＞95%）。

表征手段：通过SDS-PAGE、质谱验证分子量；荧光光谱仪检测激发/发射波长；流式细胞术评估标记活性（如IgG结合能力保留＞90%）。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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