TRITC-Heparin,四甲基罗丹明异硫氰酸酯标记肝素的主流合成策略
产品名称:TRITC-Heparin,四甲基罗丹明异硫氰酸酯标记肝素的主流合成策略
1. 合成路径与关键步骤
主流合成策略:
化学偶联法:TRITC的异硫氰酸酯基团与肝素的氨基在碱性条件(pH 8-9)下反应,形成硫脲键。例如:
步骤1:肝素溶解于碳酸盐缓冲液(pH 9),加入TRITC(1-5倍摩尔比)。
步骤2:室温避光反应2-4小时,氮气保护防止氧化。
步骤3:透析(截留分子量3.5-10 kDa)或制备型HPLC纯化,去除未反应TRITC及小分子杂质,纯度≥95%,PDI≤1.05。
关键条件控制:
温度与pH:反应温度25-37℃,pH 8-9,避免高温导致TRITC光氧化或肝素降解。
溶剂与保护:干燥PBS/DMSO,氮气保护,防止水分/氧气引发副反应。
催化剂:无需额外催化剂,反应自发进行;可添加抗氧化剂(如BHT)防止荧光淬灭。
2. 质量控制关键标准
结构验证:
NMR/FTIR:确认TRITC与肝素的连接位点(硫脲键特征峰1550 cm⁻¹),纯度≥95%,分子量偏差±10%。
质谱(MS):MALDI-TOF验证分子量,确保偶联效率(TRITC标记率≥90%)。
荧光光谱:激发/发射波长、量子产率及光稳定性测试,确保TRITC荧光特性保留(量子产率≥60%)。
生物安全性评估:
细胞毒性:MTT法评估对HEK293、HeLa等细胞的毒性(IC₅₀>100 μM)。
溶血试验:兔红细胞溶血率<5%,确保血液相容性。
免疫原性:通过ELISA检测抗TRITC-Heparin抗体产生,评估免疫反应风险。
稳定性测试:
加速老化试验:40℃/75% RH条件下3个月,监测纯度、分子量及荧光强度变化(荧光保留率≥80%)。
储存条件:-20℃以下避光干燥保存,溶液现配现用,避免反复冻融。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

关于我们:
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