6-CR6G Succinimidyl Ester的应用优势与实验设计
产品名称:6-CR6G Succinimidyl Ester的应用优势与实验设计
一、应用优势
高灵敏度与特异性:
荧光增强:结合钙离子或生物分子后荧光强度提升显著(信噪比优于传统探针如Fluo-4),适合微小信号检测(如神经元动作电位、药物刺激钙瞬变)。
选择性标记:琥珀酰亚胺酯基团优先与氨基反应,减少非特异性结合,适用于蛋白质、抗体、核酸等生物分子标记。
生物相容性与稳定性:
低毒性:罗丹明类染料对细胞毒性低,兼容活细胞实验(如长时间成像、流式细胞术)。
化学稳定性:在生理pH(6.5-8.0)及温度(25-40℃)下信号稳定,避免代谢酸化或温度波动导致的假阳性。
实验兼容性:
多场景适配:支持流式细胞术、共聚焦显微镜、高通量筛选(如FDSS/FLIPR)及体内成像,兼容细胞内酯酶水解机制(如AM酯形式可穿透细胞膜并转化为亲水探针)。
二、实验设计要点
标记条件优化:
反应体系:无水DMSO溶解染料,与生物分子(如抗体/蛋白质)在PBS缓冲液(pH 7.5-8.5)中反应,室温或37℃下1-2小时,需添加Pluronic F-127增强疏水性染料溶解性。
控制变量:避免金属离子(如Cu²⁺)干扰,严格除水除氧,防止副反应(如水解、自聚)。
纯化与质量控制:
纯化方法:透析、凝胶过滤或离子交换色谱去除未反应染料及副产物,HPLC/质谱验证标记效率及产物纯度(纯度≥95%)。
光谱验证:荧光光谱分析确认激发/发射波长,确保标记后信号稳定性。
应用场景设计:
流式细胞术:细胞表面标记、免疫分选及细胞周期分析,需优化标记浓度(如1-10 μM)及孵育时间。
显微镜成像:活细胞/固定细胞荧光标记,支持双光子显微镜高时空分辨率成像(如100-1000 fps记录钙振荡)。
蛋白质研究:免疫沉淀、Western blot中抗体标记,或构建荧光探针追踪蛋白质相互作用。
体内成像:标记药物载体/纳米颗粒,追踪肿瘤靶向递送及生物分布,需评估体内半衰期及代谢产物毒性。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

关于我们:
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