AF532 carboxylic acid，AF532羧酸，AF532 COOH的质量控制

产品名称：AF532 carboxylic acid，AF532羧酸，AF532 COOH的质量控制

一、核心质量控制参数与标准

1. 化学纯度与结构确认

HPLC纯度：≥95%（通过反相HPLC检测，流动相为乙腈/水梯度，检测波长532nm），确保无显著杂质峰（如未反应原料、副产物）。

质谱验证：高分辨率质谱（HRMS）确认分子量（如C₃₀H₃₁N₃O₁₀S₂，精确分子量约669.14），排除结构异常。

核磁共振（NMR）：¹H NMR和¹³C NMR验证羧酸基团（-COOH）及荧光基团的特征峰，确保结构完整性。

2. 荧光特性校准

激发/发射波长：激发波长532±5nm，发射波长550-560nm（需匹配荧光显微镜/流式细胞仪的滤光片，如Texas Red通道）。

量子产率：≥0.6（在PBS缓冲液中测量），确保高荧光强度。

光稳定性：抗光漂白能力优于传统染料（如罗丹明6G），需通过连续光照实验验证（如1小时照射后荧光衰减≤15%）。

斯托克斯位移：≥18nm，减少激发光与发射光的交叉干扰。

3. 物理性质与稳定性

溶解性：水溶性≥10mg/mL，兼容DMSO、DMF等有机溶剂，确保实验应用的灵活性。

pH稳定性：在pH 4.0-9.0范围内稳定，尤其在生理pH（7.4）下无显著降解。

热稳定性：4℃储存时稳定期≥1年，-20℃避光保存可延长至2年；加速老化试验（40℃/1个月）显示荧光强度衰减≤10%。

光敏感性：需避光操作，长时间光照（如日光/紫外灯）可能导致荧光淬灭，需使用锡纸包裹容器。

4. 生物相容性与毒性

细胞毒性：通过MTT/CCK-8实验验证，IC₅₀＞100μM（如HeLa细胞），确保低毒性。

动物实验安全性：在模式生物（如小鼠、斑马鱼）中评估急性/慢性毒性，LD₅₀＞500mg/kg。

生物相容性：与蛋白质、抗体、核酸等生物分子偶联后，需验证活性保留（如抗原结合能力、酶活性）。

二、关键测试方法与流程

1. 纯度与结构分析

HPLC方法：C18柱（4.6×250mm，5μm），流动相A（0.1% TFA水溶液），流动相B（乙腈），梯度洗脱（0-30min，5-95% B），检测波长532nm。

质谱条件：ESI源，正离子模式，扫描范围m/z 500-1000，分辨率＞30,000。

NMR溶剂：DMSO-d6或CD₃OD，扫描频率400MHz（¹H）和100MHz（¹³C）。

2. 荧光性能测试

荧光分光光度计：激发波长扫描范围500-550nm，发射波长扫描范围530-600nm，狭缝宽度5nm。

量子产率计算：采用相对法，以罗丹明B（量子产率0.7）为标准，在相同溶剂条件下比较荧光强度。

光漂白实验：使用共聚焦显微镜连续照射（488nm激光，功率1mW），每5分钟记录荧光强度，绘制衰减曲线。

3. 稳定性与相容性测试

pH稳定性实验：将染料溶解于不同pH缓冲液（如柠檬酸、PBS、碳酸盐），室温放置24小时后HPLC检测纯度变化。

热稳定性试验：40℃恒温箱中放置1个月，定期取样检测荧光强度和纯度。

偶联效率验证：与NHS酯或EDC/NHS体系反应，通过SDS-PAGE或HPLC分析标记产物，计算偶联比（染料/蛋白质摩尔比）。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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