AF532 NHS Ester，AF532琥珀酰亚胺酯的核心物理性质

产品名称：AF532 NHS Ester，AF532琥珀酰亚胺酯的核心物理性质

1. 荧光特性

激发/发射波长：激发波长532±5nm，发射波长550-560nm（橙红色荧光），斯托克斯位移≥18nm，与绿光染料（如AF488）光谱重叠度低，适合多色标记。

量子产率：≥0.6（在PBS缓冲液中），荧光强度高，抗光漂白能力优于传统染料（如罗丹明6G），1小时连续光照下荧光衰减≤15%。

光谱匹配性：兼容荧光显微镜（如Texas Red通道）、流式细胞仪及共聚焦显微镜，支持多通道成像。

2. 化学结构与分子特性

分子式与分子量：基于AF532羧酸结构，NHS酯衍生后分子量约增加100-120 Da（具体取决于合成路径），典型分子量范围650-750 Da。

活性基团：NHS酯（琥珀酰亚胺酯）在碱性条件（pH 7.5-8.5）下与伯胺基团（如蛋白质赖氨酸残基）反应，形成稳定酰胺键，偶联效率高。

纯度标准：≥95%（通过HPLC检测，乙腈/水梯度洗脱），无显著杂质峰，质谱验证分子量准确性。

3. 溶解性与溶剂兼容性

水溶性：有限，需在有机溶剂（如DMSO、DMF）中溶解后稀释至水相，推荐浓度≤1mg/mL。

缓冲体系兼容性：在碳酸盐缓冲液（pH 8.5）、PBS（pH 7.4）中稳定，避免磷酸盐缓冲液（可能螯合金属离子影响反应）。

有机溶剂耐受性：兼容DMSO、DMF、乙腈，但高浓度（＞10%）可能导致沉淀或荧光淬灭。

4. 稳定性与储存条件

储存稳定性：-20℃避光干燥保存，有效期≥1年；4℃避光保存稳定期≥6个月。避免反复冻融，建议分装为单次使用量。

光稳定性：对紫外/蓝光敏感，需全程避光操作（铝箔包裹容器），使用抗淬灭封片剂（如ProLong Gold）延长荧光寿命。

pH与温度耐受性：pH 4-9范围内荧光强度稳定，极端pH（＜4或＞10）可能导致水解或荧光淬灭；37℃孵育24小时荧光保持≥90%，高温（＞50℃）加速降解。

化学稳定性：避免还原剂（如DTT、β-巯基乙醇）或高浓度亲核试剂，防止NHS酯水解或染料降解。

5. 生物相容性与应用适配性

细胞毒性：低毒性（IC₅₀＞100μM），与生物分子（如抗体、蛋白质）偶联后活性保留良好，适用于体内外实验（如免疫荧光、流式细胞术、Western blot）。

偶联效率：推荐染料:蛋白质摩尔比1:5至1:20，室温反应1-2小时，通过凝胶过滤或透析纯化去除游离染料。

多色标记能力：与AF488（绿色）、AF647（红色）等联用，光谱重叠度低，适合共定位分析及多重染色。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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