AF488 aldehyde,AlexaFluor ALD,AF488 醛基的动态成像能力
产品名称:AF488 aldehyde,AlexaFluor ALD,AF488 醛基的动态成像能力
一、反应机制与标记效率赋能动态追踪
特异性共价标记:醛基(-CHO)与生物分子(如蛋白质、肽类、多糖)的伯胺(-NH₂)发生Schiff碱缩合反应,形成稳定共价键;在酸性pH(5-9)下可靶向N端氨基,经氰基硼氢化钠还原后形成C-N键,实现高特异性、低背景标记。
信号放大与稳定性:通过生物素-链霉亲和素系统(Kd≈10⁻¹⁵ M)可放大信号,标记比例优化为3-4个荧光团/蛋白分子,确保强荧光信号同时保留生物活性;标记后荧光信号稳定,耐受pH 4-10、高盐及温度(0-40℃),适合复杂生理环境成像。
二、动态成像应用场景与优势
细胞骨架动态追踪:标记F-肌动蛋白(如鬼笔环肽偶联物)、微管,实时观察细胞迁移、分裂(如分裂环形成)、伪足延伸、细胞极性变化等过程,解析细胞力学与信号传导机制。
蛋白质转运与代谢研究:追踪内吞途径、蛋白质转运路径(如核质穿梭)、代谢酶活性,揭示细胞信号转导、物质代谢动态规律。
疾病机制与药物开发:标记肿瘤标志物(如EGFR)、病毒抗原,动态监测肿瘤转移、药物作用效果(如化疗药物对肌动蛋白聚合的抑制),辅助抗肿瘤药物筛选与毒性评估。
活细胞成像与流式分析:支持活细胞长时间动态观察(控制紫外光剂量<50ms/帧减少损伤),结合流式细胞术实现细胞表面标志物定量检测、多色分选,提升数据维度与准确性。
三、生物相容性与操作优化
低毒性与细胞通透性:水溶性良好,可穿透细胞膜进入胞内,对细胞活性影响小,适用于活细胞/组织成像;链霉亲和素偶联物(如AF488-Streptavidin)近中性等电点(pI≈5-6),减少非特异性吸附。
存储与操作规范:需避光、干燥存储(-20℃或4℃避光),避免反复冻融;反应需在无氧、避光条件下进行,控制pH、温度(室温至37℃)确保标记效率;活细胞成像需缩短曝光时间,减少光损伤。
四、注意事项与局限
安全性:醛基具一定毒性,操作需佩戴防护装备,废液按危险废物处理;避免与强还原剂接触,防爆炸风险。
实验设计:多色实验需荧光补偿校正,消除信号串扰;固定细胞避免甲醇(破坏F-肌动蛋白),推荐4%多聚甲醛固定;标记后需纯化去除未反应试剂,减少非特异性结合。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

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