200554-19-4，AF350 NHS Ester，AF350琥珀酰亚胺酯的反应机制与标记效率

产品名称：200554-19-4，AF350 NHS Ester，AF350琥珀酰亚胺酯的反应机制与标记效率

一、反应机制：NHS酯与氨基的特异性共价结合

化学本质：AF350 NHS Ester通过N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯基团与生物分子（如蛋白质、抗体、核酸）的伯氨基（-NH₂）发生亲核取代反应，形成稳定的酰胺键（-CONH-），同时释放N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）副产物。反应在pH 7.5-9.0的缓冲液（如PBS、碳酸盐缓冲液）中进行，氨基去质子化后亲核性增强，攻击NHS酯羰基碳，完成酰胺化。

反应条件优化：

pH值：最佳范围7.5-8.5，过低（<7.0）导致氨基质子化失去亲核性，过高（>9.0）加速NHS酯水解。

温度与时间：室温（20-25℃）下反应1-2小时，低温（4℃）可延长至4-6小时以减少非特异性反应，避免高温（>37℃）引发水解或变性。

溶剂与缓冲液：优先使用无胺缓冲液（如PBS、硼酸盐缓冲液），避免Tris、甘氨酸等含游离胺的缓冲液；可添加5-20% DMSO/DMF助溶，但需控制比例（<30%）防蛋白质变性。

二、标记效率影响因素：多维度调控策略

摩尔比控制：染料与目标分子（如抗体、蛋白）摩尔比通常为2-5:1，通过紫外光谱法（A280蛋白吸收与AF350特征峰A346吸光度）计算F/P值（每摩尔蛋白结合染料摩尔数），确保标记密度适中（避免过度标记导致蛋白聚集或活性丧失）。

纯化验证：反应后通过凝胶过滤（Sephadex G-25）、超滤管或透析去除游离染料及NHS副产物，确保标记物纯度，降低背景信号。

生物分子特性：蛋白质的氨基含量（如赖氨酸ε-氨基）、等电点（pI）、稳定性及糖基化程度影响标记效率。例如，抗体需预先纯化去除稳定剂（如BSA），避免非特异性结合。

环境因素：水含量需严格控制以抑制NHS酯水解；避免强还原剂（如硫醇）或金属离子干扰反应。

三、荧光特性与稳定性：蓝色荧光的优势

光谱参数：激发波长346-364 nm（紫外-近紫外），发射波长442 nm（蓝光区），量子产率约0.7-0.9，光稳定性为FITC的10倍，抗光漂白能力强，支持长时间（数小时）活细胞/组织成像。斯托克斯位移近100 nm，减少激发光干扰，信噪比良好。

多色兼容性：蓝光信号与绿光（AF488）、红光（AF594）、远红光（AF647）及DAPI（核染色）无串扰，适配共聚焦显微镜、流式细胞仪等多平台，支持4通道以上多色共定位（如细胞骨架-微管-细胞核同步成像）。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

良林科研服务平台是西安瑞胜生物科技有限公司旗下的品牌，良林科研服务平台致力于服务全球研发工作者，公司配备了化合物合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，良好有完备的生产，研发，检测全生产线的能力。良林生物致力于为客户提供有机化合物定制合成及生产服务。 我公司生产销售科研级别的药物传递和药物纳米靶向方面的产品，公司目前经营的产品主要有合成磷脂，PEG衍生物，嵌段共聚物，纳米金，磁性纳米颗粒，介孔二氧化硅，活性荧光染料，荧光量子点，点击化学和大环配体等等。

我们可以提供的相关产品

Amine PEG RB，氨基聚乙二醇罗丹明B，RB-PEG-NH2

NH2-PEG-FA，氨基-PEG-叶酸，Amine-PEG-FA

Amine-PEG-FITC，氨基聚乙二醇荧光素，Amine-PEG-Fluorescein，2411381-38-7

羟基聚乙二醇丙烯酸酯，AC-PEG-OH，‌丙烯酸酯-PEG-羟基

丙烯酸酯-PEG-丙炔，AC-PEG-Alkyne，‌炔基聚乙二醇丙烯酸酯

AC-PEG-SCM，丙烯酸酯-PEG-琥珀酰亚胺乙酸酯，Acrylate-PEG-SCM

‌Acrylate-PEG-Do‌，丙烯酸酯-PEG-多巴胺，Ac-PEG-Do