endo-BCN-SS-NHS ester，endo 丙烷环辛炔-双硫键-活性酯的多维度调控策略

产品名称：endo-BCN-SS-NHS ester，endo 丙烷环辛炔-双硫键-活性酯的多维度调控策略

一、核心结构与反应机制

三功能模块协同

endo-BCN基团：内式双环[6.1.0]壬炔（张力炔烃），通过无铜点击化学（SPAAC）与叠氮化物快速生成稳定三氮唑键，反应无需催化剂、条件温和（生理pH/室温），生物正交性良好。

二硫键（SS）：可被DTT、TCEP或细胞内谷胱甘肽（GSH，10-50 mM）还原断裂，实现偶联物的可控释放或组分分离，适用于可逆偶联、蛋白纯化及环境响应释放场景。

NHS酯基团：与生物分子伯胺（如赖氨酸ε-氨基、氨基修饰核酸/纳米材料）在pH 7.0-8.5下高效反应生成酰胺键，偶联效率高，需避免酸性/强碱性环境及含游离胺缓冲液（如Tris）。

二、多维度调控策略

1. 反应条件优化

pH与温度：NHS酯反应最佳pH 7.0-8.5（如PBS/碳酸盐缓冲液），室温（20-25℃）反应1-2小时；低温（4℃）可延长至4-6小时以减少非特异性反应，避免高温（>37℃）引发水解或变性。

溶剂与浓度：溶于DMSO/DMF（浓度10-20 mM），控制比例<30%防蛋白质变性；目标分子浓度建议≥1 mg/mL，过低浓度降低碰撞频率。

摩尔比控制：染料与目标分子摩尔比2-5:1，通过紫外光谱（A280蛋白吸收与AF350特征峰A346吸光度）计算F/P值（每摩尔蛋白结合染料摩尔数），确保标记密度适中。

2. 标记效率提升

纯化验证：反应后通过凝胶过滤（Sephadex G-25）、超滤管或透析去除游离染料及NHS副产物，确保标记物纯度，降低背景信号。

生物分子特性适配：蛋白质需预先纯化去除稳定剂（如BSA），避免非特异性结合；核酸/多糖需氨基修饰以增强反应活性。

3. 二硫键断裂调控

断裂条件：10-50 mM DTT/TCEP或10 mM GSH（细胞内环境），室温数分钟至1小时内断裂，实现偶联物的可逆释放或组分分离。

应用场景：蛋白质标记后纯化、药物递送系统中的环境响应释放（如肿瘤细胞内GSH高表达触发药物释放）、生物材料功能化（如水凝胶动态调控）。

4. 生物相容性与安全性管理

细胞毒性控制：低毒性，适用于活细胞成像（如细胞膜标记、内吞途径追踪），需控制用量及紫外光曝光时间（<50ms/帧），避免氧化应激。

储存与操作：-20℃避光干燥保存，避免反复冻融；操作时佩戴手套、护目镜，废液按危险废物处理，防环境污染。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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