TRITC Phalloidin，四甲基异硫氰酸罗丹明标记鬼笔环肽的操作要点与注意事项

产品名称：TRITC Phalloidin，四甲基异硫氰酸罗丹明标记鬼笔环肽的操作要点与注意事项

一、操作流程与核心参数

样本制备

细胞固定：采用4%多聚甲醛（溶于PBS，pH 7.4）室温固定10-30分钟。禁止使用含甲醇的固定剂（甲醇破坏肌动蛋白结构）。

透化处理：固定后用0.5% Triton X-100（溶于PBS）室温透化5分钟，或用-20℃预冷丙酮脱水处理。

清洗：固定/透化后需用PBS清洗2-3次，每次5-10分钟，彻底去除残留试剂。

染色步骤

工作液配制：储存液（如20μM）用PBS稀释至80-200 nM（推荐100-150 nM），可加入1% BSA降低非特异性背景。

孵育条件：室温避光孵育20-60分钟（4℃或37℃亦可），需密封容器防止溶液挥发。孵育时避免强光照射。

清洗：染色后PBS清洗3次，每次5分钟，彻底去除游离染料。

复染与封片

细胞核复染：用DAPI（100 nM）染色30秒至3分钟，随后PBS清洗。

封片：滴加抗荧光淬灭封片剂（如Fluoromount-G），盖玻片边缘用透明指甲油密封，4℃避光保存，可稳定6个月以上。

显微镜观察

滤片选择：TRITC通道（Ex/Em=540-546/565-575 nm）观察肌动蛋白，DAPI通道（Ex/Em=364/454 nm）观察细胞核。

参数控制：避免高强度激光或长时间曝光，防止光漂白。

二、关键注意事项

毒性管理

鬼笔环肽为毒蘑菇来源毒素，操作需戴手套、口罩，在通风橱中进行，避免吸入或皮肤接触。废弃物按生物危害处理。

浓度与时间优化

不同细胞类型需调整工作液浓度（80-200 nM）和孵育时间。浓度过高导致背景过高，过低则信号弱。需通过预实验确定最佳条件。

固定与透化细节

固定时间需严格控制：贴壁细胞10分钟，类器官或厚样本30分钟。透化后需充分清洗，避免Triton X-100残留影响染色。

储存与稳定性

储存液：-20℃避光分装保存，避免反复冻融（建议单次使用量分装），有效期1年。

工作液：现配现用，避免长时间放置导致荧光淬灭。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

良林科研服务平台是西安瑞胜生物科技有限公司旗下的品牌，良林科研服务平台致力于服务全球研发工作者，公司配备了化合物合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，良好有完备的生产，研发，检测全生产线的能力。良林生物致力于为客户提供有机化合物定制合成及生产服务。 我公司生产销售科研级别的药物传递和药物纳米靶向方面的产品，公司目前经营的产品主要有合成磷脂，PEG衍生物，嵌段共聚物，纳米金，磁性纳米颗粒，介孔二氧化硅，活性荧光染料，荧光量子点，点击化学和大环配体等等。

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