FITC-VB12，FITC标记维生素B12的纯化与质量控制

产品名称：FITC-VB12，FITC标记维生素B12的纯化与质量控制

1. 纯化步骤：多级分离确保高纯度

初步纯化（透析/超滤）

反应体系（FITC与VB12在碳酸盐缓冲液pH 8.5中反应数小时）含未反应FITC、自由VB12及标记产物。通过透析（分子量截断10 kDa）或超滤去除小分子杂质，减少非特异性结合。

示例：使用Sephadex G-25或G-50凝胶过滤层析，基于分子大小差异分离FITC-VB12与未标记组分，收集主峰后冷冻干燥。

高效液相色谱（HPLC）精制

采用反相C18柱，流动相为水-乙腈梯度系统，FITC-VB12与未标记VB12保留时间差异显著，可实现高分辨率分离。纯度要求≥95%，确保后续实验准确性。

纯化产物呈透明至淡黄色，具明显绿色荧光，需避光保存。

2. 质量控制指标：多维度验证确保可靠性

光谱特性验证

紫外-可见光谱：FITC特征峰约495 nm，VB12特征峰约361 nm，两者共存确认标记成功。

荧光光谱：激发波长约495 nm，发射波长约520 nm，荧光量子产率需符合标准（如FITC典型值约0.92），避免光漂白。

结构与分子量验证

质谱（MS）：确认标记后分子量变化，区分未标记VB12（分子量约1355 g/mol）与FITC-VB12（分子量增加FITC部分，约1600-1800 g/mol）。

核磁共振（NMR）：辅助确认FITC芳香环与VB12核苷结构共存，评估偶联效率及结构完整性。

生物活性验证

细胞摄取实验：通过荧光显微镜或流式细胞术观察FITC-VB12在细胞中的摄取、转运及分布，验证VB12受体结合能力及代谢途径保留。

受体结合实验：利用流式细胞术检测FITC-VB12与细胞表面VB12受体的结合亲和力，确保标记不影响原有生物功能。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

良林科研服务平台是西安瑞胜生物科技有限公司旗下的品牌，良林科研服务平台致力于服务全球研发工作者，公司配备了化合物合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，良好有完备的生产，研发，检测全生产线的能力。良林生物致力于为客户提供有机化合物定制合成及生产服务。 我公司生产销售科研级别的药物传递和药物纳米靶向方面的产品，公司目前经营的产品主要有合成磷脂，PEG衍生物，嵌段共聚物，纳米金，磁性纳米颗粒，介孔二氧化硅，活性荧光染料，荧光量子点，点击化学和大环配体等等。

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