5-羧基荧光素-二苯并环辛炔，1384485-04-4，5-FAM DBCO的应用验证方法

产品名称：5-羧基荧光素-二苯并环辛炔，1384485-04-4，5-FAM DBCO的应用验证方法

1. 化学结构与光谱特性验证

结构确认：

通过质谱（MS）验证分子量（理论值：5-FAM-DBCO约600-700 g/mol，具体依结构修饰），确保羧基、DBCO及荧光素母核共存。

核磁共振（NMR）确认DBCO环辛炔结构及5-FAM羧基连接位点，排除副产物或降解产物。

光谱特性：

荧光光谱：激发波长490-495 nm，发射波长515-525 nm（绿色荧光），荧光量子产率约0.85-0.95（高于FITC），适配Cy2/FITC通道。

紫外-可见光谱：5-FAM特征峰（490 nm）与DBCO特征峰（300-320 nm）共存，确认偶联成功。

2. 生物正交反应效率验证

点击化学反应动力学：

与叠氮化物（-N₃）在无铜条件下（SPAAC反应）反应速率10²-10³ M⁻¹s⁻¹，生理条件（37℃，pH 7.4）下30分钟完成。通过HPLC/MS监测反应进程，计算标记效率（纯度≥95%）。

反应特异性验证：与氨基、巯基等天然基团无交叉反应，避免非特异性结合。

反应条件优化：

浓度比例（DBCO:叠氮=1:1至1:10），pH 7-9缓冲液（如PBS），避免酸性环境破坏荧光团。

溶剂选择：水相缓冲液或DMSO/DMF（终浓度＜5%），避免有机溶剂沉淀或抑制反应。

3. 生物活性与应用验证

细胞成像与标记：

活细胞标记：通过荧光显微镜/流式细胞术观察叠氮标记的细胞表面蛋白、脂质或核酸（如代谢标记的糖蛋白、脂质体），验证标记效率及细胞内分布。

固定细胞/组织：结合免疫荧光技术，验证标记抗体的特异性及信号强度，避免背景干扰。

多色实验与光谱分离：

与FITC、AF594等染料组合时，通过共聚焦显微镜滤片优化或光谱拆分技术减少荧光串扰，确保多色标记准确性。

定量分析：

通过荧光强度变化定量检测目标分子（如代谢产物、受体表达水平），结合标准曲线实现精准定量。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

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