AF488 羧基,AF488 carboxylic acid的合成与储存
产品名称:AF488 羧基,AF488 carboxylic acid的合成与储存
一、合成方法
核心化学活化路径
活化反应:AF488羧基需通过EDC/NHS(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺/琥珀酰亚胺)或DCC/NHS(二环己基碳二亚胺/琥珀酰亚胺)等试剂活化羧基,转化为活性中间体(如NHS酯),再与生物分子(蛋白质、抗体、多肽、核酸)的伯胺基团(如赖氨酸残基)发生酰胺化反应,形成稳定共价键。
反应条件:
缓冲液:使用无伯胺缓冲液(如PBS、碳酸盐缓冲液pH 8.0-9.0),避免含胺缓冲液(如Tris、甘氨酸)。
温度与时间:室温反应15分钟至2小时,或4℃过夜;固相肽合成中可加入HATU等活化剂原位修饰肽链。
溶剂:水溶性缓冲液(PBS、HEPES)或极性有机溶剂(DMSO、DMF),无需高比例有机相助溶。
纯化与鉴定
通过高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)、核磁共振(NMR)纯化并确认结构,确保纯度≥95%(HPLC质控)。
去除游离染料可使用固相载体(如Sephadex G-25柱)或离心柱(Thermo Fisher试剂盒)。
应用场景
作为AF488系列活化试剂(如NHS酯、马来酰亚胺)的合成前体。
用于定制化荧光探针制备、生物大分子标记(免疫荧光、流式细胞术、共聚焦显微镜)、多色荧光成像及生物传感平台构建。
二、储存条件
长期储存
环境:-20℃以下避光、干燥、密封保存,避免反复冻融、高温、潮湿及光照。
包装:真空密封状态下稳定性高,有效期长;建议分装小体积母液(5-10 mM),用无水DMSO或MES缓冲液配制,避光冻存。
使用注意事项
操作:全程避光操作,防止荧光淬灭;从冰箱取出后需室温回温30分钟至1小时再开盖,避免受潮。
兼容性:避免与强还原剂(如DTT)、含胺物质或高盐溶液接触,以防羧基还原或非特异性结合。
稳定性:荧光信号在pH 4.0-10.0范围内稳定,适配细胞裂解液、血清、组织切片等复杂生物样本;与AF555、AF647等染料无信号交叉干扰。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

关于我们:
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