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5-Carboxyfluorescein diacetate，5-羧基荧光素二乙酸酯，CAS号79955-27-4

2026-07-14 分享

5-Carboxyfluorescein diacetate，即5-羧基荧光素二乙酸酯，CAS号79955-27-4，是一种经典的细胞膜通透性荧光探针，其核心设计思路是通过在5-羧基荧光素的两个酚羟基位点引入乙酰基修饰，彻底改变分子的极性和光学特性，实现从“无荧光前体”到“强荧光产物”的功能切换。未发生水解的分子几乎没有荧光信号，乙酰基的疏水特性让整个分子可以自由穿过活细胞的磷脂双分子层，进入细胞内部后，胞内广泛存在的酯酶会快速将两个乙酰基水解剥离，生成带强负电荷的5-羧基荧光素，这种产物无法自由穿出细胞膜，从而被特异性地滞留在细胞内，发出明亮的绿色荧光。

该分子的性能优势建立在精准的结构修饰之上，两个乙酰基的引入不仅大幅提升了分子的脂溶性，还完全掩盖了荧光素母核的共轭电子体系，让游离在细胞外的探针几乎不会产生背景荧光，从源头降低了检测过程中的信号干扰。不同于普通的核酸染料，它不会与DNA或RNA发生特异性结合，也不会对细胞的代谢通路产生明显抑制，在常规使用浓度下，绝大多数活细胞都能维持正常的生理状态，不会出现凋亡或坏死的情况。水解后生成的5-羧基荧光素拥有*高的荧光稳定性，在弱酸性到弱碱性的宽泛pH区间内都能保持稳定的信号强度，不会因为胞内微环境的小幅波动出现荧光淬灭。

在微生物活性检测领域，该试剂是快速评估菌群存活状态的核心工具。针对环境水样中的浮游微生物，仅需加入低浓度的探针孵育15分钟，就能通过流式细胞仪快速统计出活细胞的占比，相比传统的平板菌落计数方法，检测周期从48小时缩短至1小时以内，还能精准识别出处于活的非可培养状态的微生物，避免漏检。在植物原生质体的活力筛选实验中，它可以快速区分出完整有活性的原生质体和破碎失活的细胞碎片，通过荧光显微镜的明场和荧光场对照，就能精准统计原生质体的分离效率，为后续的细胞融合实验筛选合格的实验材料。在微藻的生长状态监测中，利用该探针的荧光信号强度与细胞内酯酶活性的正相关性，还可以实时追踪微藻在不同光照、不同营养条件下的代谢活力变化，为优化微藻的规模化培养工艺提供动态数据支撑。

该试剂的储存条件相对宽松，在-18℃密封避光环境下可以长期稳定保存，配制好的工作液建议现配现用，避免长时间放置导致乙酰基自发水解产生背景荧光。作为一款经过数十年验证的经典探针，它凭借低毒性、高灵敏度和操作简便的特性，在环境微生物学、植物细胞生物学等多个基础研究领域持续发挥作用，是活细胞可视化检测体系中不可或缺的基础工具。

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