技术前沿

5'-Biotin Amidite，5'-生物素亚磷酰胺，5'-Biotin Phosphoramidite

2026-07-14 分享

5'-Biotin Amidite，即5'-生物素亚磷酰胺，是专为固相寡核苷酸合成技术开发的功能修饰单体，核心结构由生物素识别单元、六碳柔性连接臂和亚磷酰胺活性基团三部分组成，所有官能团的设计都完全适配自动化核酸合成仪的标准反应流程，无需对原有合成程序进行任何特殊调整，就能在寡核苷酸链的5'末端精准引入生物素标记。不同于合成完成后再对核酸进行生物素修饰的后标记方法，该单体在核酸链的延伸过程中就直接完成定点插入，标记效率更高，产物的均一性更好，还能彻底避免后标记过程中出现的非特异性修饰、产物分离纯化难度大等问题。

分子中的六碳连接臂是保障后续生物素-亲和素相互作用的关键设计，它在生物素基团和核酸磷酸骨架之间构建了足够的空间间隔，彻底消除了核酸链的负电荷对生物素结合位点的空间位阻影响，让后续加入的链霉亲和素可以毫无阻碍地与生物素形成结合常数高达10^-15 M的超稳定复合物。亚磷酰胺活性基团的化学特性经过精准优化，完全兼容常规的四步核酸合成循环，偶联效率可以达到98%以上，合成结束后经过标准的浓氨水处理脱保护，生物素基团依然能保持完整的活性，不会出现降解失活的情况。分子自带的DMT保护基，既可以用来监测该单体的实际偶联效率，也可以保留在产物上，方便后续通过反相HPLC对生物素标记的寡核苷酸进行快速分离纯化。

在核酸亲和分离领域，该试剂的应用价值得到了充分体现。针对复杂样本中的特定miRNA序列，利用该单体合成的5'端生物素标记捕获探针，可以固定在链霉亲和素修饰的磁珠表面，通过特异性的碱基互补配对，就能从总RNA样本中精准富集目标miRNA，去除样本中大量的杂蛋白和非特异性核酸干扰，后续的测序检测灵敏度可以提升两个数量级以上。在核酸适配体的筛选过程中，通过该单体修饰的文库序列，可以快速固定在亲和层析柱上，高效完成多轮的筛选富集，大幅降低SELEX筛选的实验周期。在DNA纳米技术的组装实验中，5'端的生物素标记可以将设计好的DNA纳米结构精准固定在修饰了链霉亲和素的云母片表面，方便通过原子力显微镜直接观测纳米结构的形貌，为验证DNA折纸的组装效果提供直观的表征手段。

由于亚磷酰胺基团对水汽极其敏感，该试剂必须在-20℃的无水、避光环境中密封储存，取用的时候需要提前将试剂瓶恢复到室温，再在干燥的惰性气体手套箱中完成称量和溶解操作，避免接触空气中的水汽导致活性基团水解失活。作为核酸合成与生物亲和技术的交叉产物，它为寡核苷酸的功能化修饰提供了标准化、高效率的解决方案，推动了核酸分离、纳米组装等多个领域的技术迭代。

屏幕截图2026-03-19103759.jpg

关于我们：

良林科研服务平台是西安瑞胜生物科技有限公司旗下的品牌，良林科研服务平台致力于服务全球研发工作者，公司配备了化合物合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，降有完备的生产，研发，检测全生产线的能力。良林生物致力于为客户提供有机化合物定制合成及生产服务。我公司生产销售科研级别的药物传递和药物纳米靶向方面的产品，公司目前经营的产品主要有合成磷脂，PEG衍生物，嵌段共聚物，纳米金，磁性纳米颗粒，介孔二氧化硅，活性荧光染料，荧光量子点，点击化学和大环配体等等。