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Casein-FITC Conjugate，FITC-Casein，酪蛋白异硫氰酸荧光素偶联物

2026-07-17 分享

Casein-FITC Conjugate，也常被称为FITC-Casein，是将异硫氰酸荧光素（FITC）通过共价键标记到酪蛋白分子上得到的荧光偶联物，是体外蛋白酶活性检测实验中最经典的荧光标记蛋白底物。FITC分子上的异硫氰酸基团可以在弱碱性条件下，与酪蛋白氨基酸残基侧链上的氨基发生共价结合，通过控制反应体系中FITC和酪蛋白的投料比例，可以精准调控每个酪蛋白分子上标记的荧光素数量，既保证足够的荧光信号强度，又避免标记过度导致酪蛋白变性失活。

未被蛋白酶水解时，完整的Casein-FITC Conjugate分子处于折叠状态，分子上大量的FITC荧光基团彼此靠近，会发生显著的自淬灭效应，此时体系整体的荧光信号非常微弱。当体系中存在蛋白酶时，酪蛋白的肽链会被蛋白酶逐步切割成大量短肽片段，原本聚集在一起的FITC分子被分散开，自淬灭效应被解除，体系的荧光强度会在短时间内快速上升，荧光信号的增强幅度和体系中的蛋白酶活性呈严格的线性相关关系，这也是这个试剂用于蛋白酶定量检测的核心原理。

在普通的蛋白酶活性比色检测方法中，往往需要经过长时间的孵育、多次的试剂添加和显色反应，操作步骤繁琐，检测结果的重复性容易受到人为操作误差的影响。而使用Casein-FITC Conjugate建立的荧光检测体系，只需要将偶联物与待测样本在合适的缓冲体系中共同孵育，之后直接通过荧光分光光度计读取体系的荧光强度，就能快速计算出对应的蛋白酶活性，整个检测过程操作简单，检测灵敏度比传统的比色方法高出一个数量级以上，还能适配96孔板实现高通量的批量样本检测。

除此之外，它还被应用于细胞外蛋白酶分泌特性的相关研究中。科研人员可以将Casein-FITC Conjugate包被在细胞培养板的底部，接种细胞后，细胞分泌到胞外的蛋白酶会逐步水解板底的荧光标记酪蛋白，释放出带有绿色荧光的短肽片段，通过检测上清中的荧光强度，就能定量反映出不同细胞的胞外蛋白酶分泌活性。这种方法操作简便，不需要复杂的样本前处理，为研究肿瘤细胞侵袭相关的基质金属蛋白酶活性、微生物分泌的胞外蛋白酶特性等方向的基础研究，提供了一种高效可靠的定量检测手段。

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