5‑dROX succinimidyl ester，5‑dROX 琥珀酰亚胺酯，5‑dROX‑SE

5‑dROX succinimidyl ester，5‑dROX 琥珀酰亚胺酯（5‑dROX‑SE），分子量 700.57，属于卤代改性 X‑罗丹明衍生物，分子苯环上引入两组氯原子取代，是四色荧光测序染料组内关键红色荧光组分。染料本体为深红色固体，可溶于无水 DMSO、DMF，激发波长 588 nm，发射波长 610 nm，光谱位置与普通 ROX 产生明显偏移，氯原子的吸电子效应调整共轭电子云分布，实现发射光谱红移，同时降低染料分子之间的光谱串扰，适合多色荧光并行检测体系。分子携带琥珀酰亚胺活性酯官能团，在 pH7.5‑8.5 弱碱性环境，能够和伯氨基发生酰化反应，生成稳定酰胺共价键，完成荧光基团接枝修饰。

普通未卤代 ROX 染料，在多通道检测时容易和其余三色染料光谱发生重叠，造成信号串色，增加光谱解算难度；而 5‑dROX 经过二氯结构修饰，荧光发射峰进一步向长波方向移动，光谱带宽收窄，与绿色、黄色、橙色染料之间光谱分离度显著提升，减少信号叠加干扰，非常适合多荧光通道同步采集场景。该染料不溶于纯水，实验操作必须预先配置无水有机母液，再稀释进碳酸氢盐标记缓冲；NHS 活性酯遇水环境*易水解，母液现配现用，避免长时间放置，水解生成无反应活性羧酸杂质，抬升背景荧光，降低标记产物纯度。

该试剂除用于蛋白、氨基修饰寡核苷酸标记之外，核心定位为荧光测序染料的合成中间体，可进一步衍生制备终止子荧光标记物，适配多色荧光读取方案。标记投料摩尔比需要严谨调控，染料过量会引发荧光自淬灭，同时改变底物电荷状态，引发分子聚集沉淀；投料不足则标记度偏低，荧光信号偏弱，一般摩尔投料区间控制 4‑12 倍，按照底物分子类型做参数微调。产物共轭物适配长波长荧光成像设备、毛细管电泳荧光检测平台。储存条件‑20℃密封避光干燥，必须分装小份规避反复冻融，防止活性基团降解。样品质控依靠 HPLC 检测染料本体纯度，紫外‑可见分光光度法测定标记度 DOL，保障批次之间光谱性能稳定，为多色荧光复合标记体系提供高分离度红色荧光构建单元。

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