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5‑Carboxyfluorescein diacetate，5‑羧基荧光素二乙酸酯，CAS：79955‑27‑4

2026-08-20 分享

5‑Carboxyfluorescein diacetate，5‑羧基荧光素二乙酸酯（5‑CFDA），CAS：79955‑27‑4，分子量 460.39，属于掩蔽型荧光素探针，分子荧光素母核上两个酚羟基被乙酰基团封闭保护，分子本身几乎无荧光信号，属于荧光关闭状态；当乙酰酯键被酯酶催化水解脱除乙酰保护基团，生成 5‑羧基荧光素，释放强烈绿色荧光，激发波长 495 nm，发射波长 520 nm，依靠荧光开关响应实现对酯酶活性的信号读取。试剂外观浅黄色固体粉末，可溶于 DMSO、乙醇，不直接溶于纯水，‑20℃避光干燥储存。

乙酰基团修饰改变分子极性，未水解的 5‑CFDA 拥有较强疏水性；水解之后生成的 5‑羧基荧光素带有羧基与酚氧负离子，分子极性大幅提升，携带负电荷，不易自由穿透脂质双层结构，水解产物被限制在反应微环境之内，减少信号扩散流失。该探针核心响应机制依靠酯酶催化酯键水解，化学水解速率缓慢，非酶促背景信号较低，适合体外体系酯酶活性定量分析，可用于酶抑制剂筛选、催化体系动力学参数测定，通过荧光强度随时间变化曲线计算酶促反应速率常数。

水溶液体系配置母液必须使用无水有机溶剂，探针水溶液不能长期存放，在中性 pH 条件下会发生缓慢非酶促水解，逐步产生本底荧光干扰实验结果，母液现配现用。实验设置空白对照组扣除自发水解带来背景信号；探针投料浓度需要合理控制，高浓度探针会造成溶解度不足析出固体颗粒，带来散射噪声，一般工作浓度维持在微摩尔级别。反应结束可借助荧光分光光度计连续采集动力学曲线，也适配微孔板高通量荧光读取平台。5‑CFDA 不具备氨基反应活性，无法直接共价标记大分子，主要作为酶响应荧光报告底物使用，区别于 FAM‑NHS 这类共价标记染料，为体外酯酶催化体系提供开关型荧光传感工具。

屏幕截图2026-03-19104621.jpg

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