Alexa Fluor555 NHS，AF555活性酯，AF555‑NHS‑ester

Alexa Fluor555 NHS，AF555活性酯（AF555‑NHS‑ester）是Alexa Fluor系列的氨基反应型荧光染料，分子包含稠环类荧光发色母核以及琥珀酰亚胺酯离去基团，专用于各类含伯氨基底物的共价荧光修饰。该染料激发波长555 nm，发射波长565 nm，处于橙红色荧光波段，摩尔消光系数高，荧光量子产率优异，染料分子经过结构优化，有效降低染料分子之间π‑π堆积带来的聚集淬灭效应，即便较高标记密度条件依旧可以维持稳定荧光输出。

琥珀酰亚胺酯官能团可以与底物上伯氨基发生亲核取代，生成稳定酰胺键，完成荧光基团共价固定。偶联反应适宜在弱碱性无水或者含水缓冲环境开展，体系当中不能含有游离氨基组分，游离氨基会消耗活性酯染料，大幅降低标记效率。AF555‑NHS在纯水中溶解度有限，常规操作是先用无水极性有机溶剂配置高浓度染料母液，再将母液加入反应体系；活性酯基团遇水会逐步水解，母液需要现配现用，不可长期存放水溶液母液。

该染料适配多种氨基化底物的荧光功能化修饰。氨基修饰纳米二氧化硅、聚合物微球，可利用AF555‑NHS进行表面荧光标记，获得橙红色荧光纳米颗粒，用作分散体系示踪颗粒；氨基封端聚乙二醇、氨基官能化高分子聚合物，同样可以和该活性酯反应，制备荧光标记高分子衍生物，用于高分子共混、相分离行为观测。相比于部分传统罗丹明类染料，AF555系列染料电荷经过优化，非特异性吸附现象更少，标记后底物本征理化性质扰动更小。

储存条件要求严格密封、低温、避光、隔绝水汽，水汽会加速NHS酯水解失活。避免长时间暴露在环境光照下，光照会造成荧光母核光损伤。AF555‑NHS为橙红色波段提供高性能共价标记方案，在高分子、纳米材料荧光功能化领域是十分重要的荧光合成砌块。

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