AF546‑PNA，AF546标记花生凝集素，Alexa Fluor546-Peanut Agglutinin

AF546‑PNA，中文名称AF546标记花生凝集素，是橙橙色荧光染料AF546共价偶联花生凝集素（PNA）得到的糖链荧光探针，专门识别去唾液酸化的β-1,3-半乳糖-N-乙酰半乳糖胺（T抗原）结构，在糖链末端半乳糖修饰检测领域应用广泛。花生凝集素从花生种子中分离纯化，天然状态为四聚体糖蛋白，四个亚基共同构成多个糖识别位点，当糖链末端存在唾液酸残基遮盖结合位点时，PNA无法结合，因此该探针常搭配唾液酸酶预处理样本，用来定位被唾液酸封闭的T抗原结构，判断糖链末端的唾液酸覆盖状态。AF546染料激发波长556 nm，发射波长573 nm，适配532nm激光，摩尔消光系数高，荧光亮度稳定，橙橙色荧光通道和绿色、远红荧光探针光谱区分良好，适合多色共染。

该探针的一大特点是可用于评估样本唾液酸封闭效应，样本经过唾液酸酶酶切，移除末端唾液酸之后，AF546‑PNA染色信号会明显增强，以此反向判断糖链上唾液酸的覆盖水平，实现对糖链末端修饰状态的间接分析，这也是它区别于其他凝集素探针的独特实验价值。在样本染色操作上，可直接对细胞爬片、组织切片染色，无需二抗，操作简便。标记工艺严格控制染料偶联数量，防止染料分子破坏PNA四聚体空间组装结构，保证多个糖结合位点完整保留，维持对T抗原的识别能力。

储存过程中需要避光、低温保存，避免高温造成四聚体解离，蛋白解离后糖结合活性会大幅下降。实验设计中，除糖竞争对照之外，还可增设唾液酸酶处理前后平行样本，对比染色信号强弱，获取糖链末端唾液酸化的修饰信息。该探针适用于细胞表面糖蛋白、糖脂末端T抗原的定位观测，用于糖链末端修饰模式研究，可用于组织切片、细胞荧光染色、凝集素细胞流式分析，是研究非唾液酸化β-1,3半乳糖糖链的经典荧光示踪试剂。

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