Alexa Fluor555 TSA 试剂盒,Alexa Fluor 555 Tyramide Signal Amplification Kit,AF555 TSA
Alexa Fluor555 TSA 试剂盒依托酪胺信号放大反应体系构建,是荧光标记领域用于信号增强的成套反应体系,核心载体为Alexa Fluor555标记的酪胺分子,该荧光基团具备橙红色荧光发射特性,激发波长集中于555 nm,发射波长565 nm,荧光亮度高,光稳定性优异,可有效降低荧光淬灭带来的信号衰减问题。酪胺分子在过氧化物酶的催化作用下会生成高活性自由基中间体,该中间体可快速与生物大分子上的酪氨酸残基发生共价结合,在目标位点实现大量荧光分子的原位沉积,以此完成信号放大,解决低丰度靶标检测时荧光信号偏弱、难以识别的问题。
整套体系包含荧光标记酪胺工作液、反应缓冲组分、酶促反应助剂等配套组分,各组分经过匹配优化,保证酶促反应速率稳定可控,减少非特异性结合。Alexa Fluor555荧光染料本身的光谱位置与常见绿色、远红荧光染料区分度良好,适合多通道荧光同步采集,在多靶标并行标记场景中,可和488通道、647通道荧光探针搭配使用,光谱串扰程度低。反应操作流程简单可控,可兼容多种固相载体以及生物样本切片基质,反应条件温和,不会破坏样本内原有抗原位点结构,标记完成后荧光信号固定于靶标位置,不会发生扩散漂移,保障空间定位信息的准确性。
该体系可应用于组织切片、细胞样本内靶标分子的荧光信号增强检测,针对样本中表达量较低的目标物质,普通直接标记法无法产生可检出信号,借助酪胺介导的信号放大机制,能够将原始信号提升数十倍,大幅拓宽检测下限。染料的抗淬灭性能适配长时间显微成像,无论是共聚焦成像还是宽场荧光成像,都可以维持稳定荧光输出,减少长时间曝光造成的信号丢失。体系的兼容性强,可适配多种前处理后的生物样本,不需要复杂的样本改造操作。在多色标记实验设计中,可灵活组合不同发射波段的TSA体系,实现同一组织切片上多个靶标的空间分布同步观测,获取多维原位信息。
反应过程中,可通过调控孵育时长、工作液稀释比例,对信号强度进行适度调节,避免信号过强造成的信号饱和,方便根据样本丰度调整实验参数。体系组分经过优化,背景荧光水平较低,能有效区分特异性荧光信号与背景噪点,提升成像图片信噪比。该标记方式依靠共价键结合,标记产物耐受后续洗涤步骤,多次漂洗不会造成荧光分子脱落,减少实验假阴性结果。

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