生物素化抗体，生物素化抗体原理

生物素化抗体，生物素化抗体原理 

在做western blot或免疫组化时常使用一抗二抗来放大、显示抗原，用酶或荧光标记二抗。生物素化的抗体，是在抗体上连接生物素（biotin），生物素能和亲和素（avitin）特异性高亲和性结合，亲和力是抗原抗体结合的一万倍，而且一个avidin可以结合四个biotin，这样又起到级联放大的作用。所以能更加灵敏的显示微量抗原，这种方法也称亲和免疫组化。

目前抗体蛋白标记技术已被广泛用于医学病理学、免疫组织化学、分子生物学、生物制药等领域的分析研究与技术测定，常见的抗体标记技术包括生物素化标记法，酶标记法，荧光素标记法和胶体金标记法。生物素化抗体标记的样品可应用酶标或荧光染料标记的亲和素或生物素-亲和素复合物来检测。

生物素-SP是其6原子间隔位于生物素和其共轭的蛋白质之间。当生物素-SP结合抗体用于酶免疫测定时，与没有间隔的生物素结合抗体相比，灵敏度会提高。当生物素-SP共轭抗体与碱性磷酸酶共轭链维定一起使用时，这一点尤为明显。显然，长间隔将生物素部分从抗体表面延伸出去，使其更容易接触到链霉亲和素的结合位点。

生物素-SP分子。分子量454.54 Da。左22.4 Ä。

图2. 标记链酶亲和素生物素法（LSAB）。A. 一抗体检测靶抗原。B. 生物素化二抗可识别一抗。C. HRP偶连链酶亲和素与生物素化的二抗体结合，与HRP偶联的二抗相比，能够显著增强信号。