如何从链霉亲和素磁珠上解离生物素化分子?

如何从链霉亲和素磁珠上解离生物素化分子?

链霉亲和素-生物素相互作用是已知*强的蛋白与其他分子间非共价的生物相互作用。生物素与链霉亲和素间的键形成非常迅速，一旦形成，就不会受到pH、温度、有机溶剂和其他变性剂等多种极端因素的影响。从链霉亲和素上分离生物素时，如果实验中使用的是生物素的衍生物或经修饰的链霉亲和素，那么需要特定形式和通常温和的方法解离，除此之外通常情况下都需要非常剧烈的方法解离，并且会使链霉亲和素变性。下面探讨了其中两种方法。

生物素化核酸：

为了从Dynabeads链霉亲和素磁珠上分离生物素化核酸，在pH 8.2的95%甲酰胺+10 mM EDTA中孵育磁珠，65°C孵育5分钟或90°C孵育2分钟。使用磁力架将磁珠吸到试管壁上，将含有生物素化核酸的上清液从试管中取出。有研究提到，在高温(120C，15分钟)下，才能在盐溶液中完全解离。另外，在6 mol/L盐酸胍溶液(pH 1.5)中也可解离；有研究指出，生物素标记的核酸探针不能用酚抽提，否则生物素核酸会进入酚层而损失；Holmberg等（Electrophoresis 26, 501-510, 2005）报道称，在用离子水短时间孵育后，可将生物素化DNA从链霉亲合素磁珠上释放（未进行测试）。

生物素化蛋白质：

对于生物素化蛋白质，则可在0.1% SDS或SDS-PAGE缓冲液中煮沸磁珠3分钟。