如何去除双链DNA中的非生物素化链？

如何去除双链DNA中的非生物素化链？

可通过碱处理或高温处理分离DNA双链。采取碱处理时，可使用0.1 M NaOH洗脱非生物素化链。通常情况下，该处理方法不会对磁珠产生任何影响。在NaOH处理前，在2X结合和洗涤缓冲液（10 mM Tris-HCl，pH 7.5，1 mM EDTA，2 M NaCl）中清洗Dynabeads/DNA复合物1次，除去上清液。高盐浓度将有助于减少电荷，从而使非特异性结合*小化。

向Dynabeads/DNA复合物中加入新鲜配制（很重要）的0.1 M NaOH溶液，室温下旋转孵育2-3分钟（*多5分钟）。除去含有非生物素化链的上清液。再用0.1 M NaOH溶液清洗Dynabeads/DNA复合物1次，除去上清液。

首次洗脱时，即可洗脱下大部分DNA。除了碱处理，也可进行加热处理，在水中95°C加热5分钟即可。为防止再退火，碱处理或高温处理后必须快速从磁珠上分离DNA，*好在冰上操作。加热会在一定程度（在水中约为7%）上引起生物素化DNA从链霉亲和素上解离。因此，通常更推荐采用碱处理法。