fitc荧光染料激发发射波长是多少？Fitc的使用方法介绍！
fitc荧光染料激发发射波长是多少？Fitc的使用方法介绍！
FITC（Fluorescein Isothiocyanate，异硫氰酸荧光素）是一种经典且广泛使用的绿色荧光染料，在免疫学、细胞生物学和生物化学实验中被用来标记抗体、蛋白质、多肽、寡核苷酸等，用于荧光显微镜、流式细胞术（FACS）、ELISA和各种生物成像。
基本信息
中文名称：异硫氰酸荧光素
英文缩写：FITC
激发波长（Ex）：约 495 nm
发射波长（Em）：约 519–525 nm
荧光颜色：绿色
分子量：约 389.4 Da（FITC-NH2）；依赖于修饰形式
溶解性：可溶于DMSO、DMF、少量有机溶剂；低水溶性
化学结构与偶联机制
功能基团：异硫氰酸基（–N=C=S）
作用机制：可与生物分子的伯胺（–NH₂）发生共价反应，常用于抗体、蛋白质或多肽的标记。
应用领域
抗体/蛋白标记
FITC常用于免疫荧光实验（IF）或流式细胞术（FACS）中标记一抗或二抗，方便追踪目标分子的表达与分布。
流式细胞术
标记细胞表面或胞内抗原，用于细胞分型、凋亡分析、活性评估等。
荧光显微成像
可检测细胞或组织中抗原的定位和表达，通过FITC标记抗体实现绿色信号显示。
多重染色
与其他荧光染料（如TRITC、DAPI、Cy5等）组合用于多通道成像实验。
DNA/RNA探针标记
可与寡核苷酸连接，用于FISH、杂交探针和qPCR探针开发。
✅ 优点
应用广泛，具有高度成熟的使用体系
成本低，易于获取
与多数检测系统兼容（如显微镜、流式、酶标仪等）
缺点和注意事项
光稳定性差：易被光照分解，长时间曝光会发生荧光淬灭，需避光操作
pH敏感：荧光强度受pH影响较大（在 pH 6.5~8.0 范围内较稳定）
易水解：异硫氰酸基团对水敏感，应现配现用
荧光寿命短：信号持续性较差，不适合长时程追踪成像
常见FITC衍生物
衍生物形式 | 用途与说明 |
FITC-NHS | 与伯胺（–NH₂）反应，常用于抗体、蛋白标记 |
FITC-dextran | 标记多糖，用于内吞实验、膜通透性检测 |
FITC-PEG | 标记聚乙二醇分子，提高水溶性、稳定性 |
FITC-avidin/streptavidin | 与生物素系统配合使用，构建检测平台 |
与其他绿色荧光染料比较
染料 | 激发/发射波长 (nm) | 光稳定性 | 特点 |
FITC | 495 / 519 | ★★ | 成本低，易获取，光稳定性较差 |
Alexa Fluor 488 | 495 / 519 | ★★★★★ | 更强信号，更高光稳定性 |
GFP（绿色荧光蛋白） | ~488 / ~509 | ★★★★ | 遗传编码表达型标签，适合活细胞 |
抗体FITC标记操作简要流程（NHS酯法）
溶解FITC-NHS于DMSO（避免水）
将蛋白质溶于碱性缓冲液（如0.1 M NaHCO₃，pH 8.5）
按比例加入FITC-NHS溶液（一般摩尔比为5~20:1）
避光孵育1小时
使用透析或凝胶过滤柱去除游离FITC
测定标记效率（通过光密度比OD495/OD280）
总结
FITC 是一种经典、高效且经济的荧光染料，适用于多种生物标记实验。它的绿色荧光信号清晰、易于检测，但在光照和pH条件下需控制，适合短期观察实验和常规标记。