靶向肿瘤新生血管温敏性脂质体的构建

靶向肿瘤新生血管温敏性脂质体的构建

作者：陆媛媛

摘要：

通过抑制血管生成饿死肿瘤和通过热疗杀死肿瘤是临床上肿瘤治疗的新策略.基于此本课题设计了靶向肿瘤新生血管和借助热疗控制药物释放的双重靶向载体,以提高药物靶向定位的精准性,减少对正常细胞的损害.

本课题以紫杉醇(paclitaxel,PTX)为模型药物,构建靶向肿瘤新生血管的K237修饰的热敏脂质体(K237-PTX-TSL),系统研究K237-PTX-TSL的制备工艺,理化性质,体外释放特性及细胞药效学. 本课题采用NH2末端PEG化技术合成靶向磷脂材料DSPE-PEG-K237,以DSPE-PEG-K237, DPPC, MSPC, DSPG,DSPE-PEG-NHS为膜材,采用薄膜分散法制备K237修饰的紫杉醇热敏脂质体(K237-PTX-TSL),以包封率,粒径和热敏释放特性为主要考察指标优化K237-PTX-TSL的处方和制备工艺.采用高速离心法和葡聚糖G-50凝胶柱层析法分离游离药物和载药K237-PTX-TSL,HPLC法测量药物的包封率和载药量;采用马尔文激光粒度仪测定K237-PTX-TSL的粒径及粒径分布和Zeta电位;利用差示扫描量热法(Differential Scanning, DSC)测量相变温度(Phase Transition Temperature,Tm);采用透析袋法测量相变温度下的释药规律并拟合释放曲线;采用CCK-8法,激光共聚焦显微成像和流式细胞仪技术评价K237-PTX-TSL和荧光素热敏脂质体(K237-CTSL)对SKOV-3和HUVEC细胞的靶向性和毒性. 优化的处方为:DPPC:DSPG:MSPC:DSPE-PEG-NHS=9:1:1:1,药脂比为1/20,磷脂浓度为5.0%,DSPE-PEG-K237占处方磷脂总量为1%.

制备得到的K237-PTX-TSL和PTX-TSL的包封率分别为(94.23±0.76)%和(95.32±0.88)%;粒测得K237-PTX-TSL和PTX-TSL的粒径分别为(88.3±4.7)nm和(80.2±3.9)nm,电荷分别为-4.5mv和-3.9mv,PDI值分别为0.13±0.01和0.15±0.01;K237-PTX-TSL的相变温度为40.805℃,K237-PTX-TSL在42℃时的体外释放*优拟合为一级动力学模型,方程为In(100-Q)=-0.0638t+4.7130(r=0.9944).42℃时20min内紫杉醇累计释放度为72.45%,60min的累计释放度为98.84%;相比之下,37℃时,60min紫杉醇的累计释放度仅为4.63%. 采用CCK-8法,流式细胞仪技术评价K237-PTX-TSL对SKOV-3和HUVEC细胞的毒性.

结果显示对于SKOV-3,PTX-TSL和K237-PTX-TSL的IC50分别是TaxoL的0.756和0.321倍(P0.05);对于HUVEC,PTX-TSL和K237-PTX-TSL的IC50分别为TaxoL的0.782和0.377倍(P0.05).PTX-TSL和K237-PTX-TSL对两种细胞的抑制作用均呈时间浓度依赖性.流式细胞仪检测药物处理后细胞周期分布状态发现,TaxoL,PTX-TSL和K237-PTX-TSL均可将SKOV-3和HUVEC细胞阻滞在G2/M期. 细胞摄取实验结果:37℃和42℃时,在钙黄绿素组,SKOV-3和HUVEC中都没有荧光,说明游离的钙黄绿素不能进入细胞,只能通过热敏脂质体包载进入细胞.37℃时,SKOV-3和HUVEC中,K237修饰的钙黄绿素热敏脂质体(K237-CTSL)和钙黄绿素热敏脂质体(CTSL)有微弱的钙黄绿素荧光.42℃时,SKOV-3和HUVEC中,K237-CTSL和CTSL均显示出强烈的钙黄绿素荧光,细胞浆内荧光较强,细胞核内荧光微弱,但K237-CTSL的信号强度显著大于CTSL组.说明K237-PTX-TSL可以增强SKOV-3和HUVEC对脂质体的摄取.

关键词：热敏脂质体 靶向肿瘤新生血管 紫杉醇 K237修饰 制备工艺 理化性质

学位级别：硕士

学位年度：2014

DOI：10.7666/d.Y2569633

版权声明：

本平台根据相关科技期刊文献、教材以及网站编译整理的内容，仅用于对相关科学作品的介绍、评论以及课堂教学或科学研究。如有侵权，请联系我们删除。