CY5-兔lgG，Cy5-Rabbit Immunoglobulin G的合成过程研究

CY5-兔lgG，Cy5-Rabbit Immunoglobulin G的合成过程研究

Cy5-兔IgG（Cy5-Rabbit Immunoglobulin G）是一种将荧光染料Cyanine5（Cy5）与兔源IgG分子通过共价偶联反应制备而成的荧光标记抗体。兔IgG为分子量约150 kDa的球形糖蛋白，主要通过Fc段与免疫系统受体结合，并通过Fab区实现特异性抗原识别。Cy5荧光染料可通过化学修饰引入，使IgG获得稳定、可检测的光学信号，从而应用于免疫荧光、流式细胞术、成像和生物传感。

合成过程研究要点如下：

反应位点选择：兔IgG分子表面分布大量赖氨酸残基，其ε-氨基为常用的标记位点。Cy5-NHS ester能够选择性地与这些氨基反应形成酰胺键。由于赖氨酸残基分布，标记过程通常是非定点的。控制反应条件和摩尔比是确保IgG保持活性的关键。

偶联反应条件：Cy5-NHS ester溶于无水DMSO或DMF，随后滴加到PBS缓冲液中的兔IgG溶液（pH 7.4–8.3）。在此pH范围内，赖氨基的去质子化程度适中，有利于与NHS酯反应。反应一般在避光条件下于室温下进行0.5–2小时。过高的pH会导致蛋白质构象改变，而过低则影响反应速率。

标记度控制：为避免过度标记影响IgG抗原结合能力，通常将染料与蛋白的摩尔比控制在3:1至10:1之间。过高的Cy5引入量会导致荧光淬灭或Fc段构象改变，降低免疫活性。实验中常通过实时检测UV吸收（280 nm用于蛋白，650 nm用于Cy5）来监控反应进程。

纯化与回收：反应完成后，通过凝胶过滤柱（如Sephadex G-25）或超滤离心（MWCO约50 kDa）去除未反应的Cy5。纯化后的Cy5-兔IgG在PBS中保存，并添加甘油或蔗糖作为稳定剂，避免冻融损伤。

表征研究：纯化后产物通过紫外-可见吸收光谱测定染料与蛋白的摩尔比（D/P值），常见范围为2–5。SDS-PAGE在荧光模式下可验证标记是否成功；荧光光谱确认Cy5发射峰是否稳定；功能性研究则需检测其与抗原的结合能力，例如ELISA或免疫印迹实验。

产品名称：CY5-兔lgG，CY5标记兔IgG

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

推荐产品：

FITC-BSA 荧光素标记牛血清白蛋白

FITC-c，RGDyK， 荧光素标记环肽c，RGDyK，

FITC-Calycosin 荧光素标记毛蕊异黄酮

FITC-CAP-18 荧光素标记抗菌肽CAP-18

FITC-CAQK 荧光素标标记CAQK多肽

FITC-Cephaeline 荧光素标记吐根酚碱

仅用于科研，不能用于人体。小编axc