CY7-Transferrin,CY7标记转铁蛋白的合成步骤概述
CY7-Transferrin,CY7标记转铁蛋白的合成步骤概述
CY7-Transferrin(CY7标记转铁蛋白)是一种通过将近红外荧光染料CY7共价标记于转铁蛋白(Transferrin, Tf)分子上的功能性蛋白探针。转铁蛋白是一种铁结合糖蛋白,主要负责血液中的铁离子运输,其高度特异性与铁结合位点和转铁蛋白受体结合能力使其成为研究铁代谢、受体介导转运及靶向递送的重要工具。CY7标记赋予转铁蛋白近红外荧光,可用于可视化追踪和功能化研究。
合成步骤概述
蛋白准备:
转铁蛋白首先需在适宜缓冲液中溶解(如PBS,pH 7.2–7.4),浓度通常为1–5 mg/mL。确保蛋白结构完整、无降解。
染料活化:
CY7常以NHS酯或马来酰亚胺衍生物形式提供,用于与转铁蛋白表面赖氨酸或半胱氨酸残基共价结合。活化染料需在干燥、避光条件下溶解于适宜溶剂(如DMSO)中。
偶联反应:
将活化CY7溶液缓慢加入转铁蛋白溶液中,通常保持蛋白与染料摩尔比在1:3–1:5范围内,以控制标记密度。反应在4–25℃条件下进行1–4小时,pH保持在7–8范围,以确保蛋白功能及荧光标记均衡。
去除游离染料:
反应完成后,采用透析、凝胶过滤(如Sephadex G-25或G-50)或超滤方法去除未结合的CY7分子,减少背景荧光并获得纯化产物。
缓冲调整与储存:
纯化后的CY7-Transferrin可浓缩并调节至储存缓冲液(含少量甘油或NaCl以稳定蛋白结构),避光低温保存,通常在4℃短期或-20℃长期保存。
特性与应用
CY7标记转铁蛋白保持铁结合活性及转铁蛋白受体识别能力,适用于体外和体内示踪、靶向递送研究及受体介导转运研究。其近红外荧光特性提供低背景、高灵敏度的可视化信号,可用于化学研究、纳米载体表面修饰及生物分子相互作用分析。
产品名称:CY7-Transferrin,CY7标记转铁蛋白
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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146368-15-2
仅用于科研,不能用于人体。小编axc