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Oregon green 488 succinimidyl ester的光学性能

2025-11-10 分享

产品名称:Oregon green 488 succinimidyl ester的光学性能

1. 结构与化学特性

分子结构:属于荧光素的氟化衍生物(如5-异构体或6-异构体),分子式为C₂₅H₁₃F₃NO₉,分子量约509.37。核心为荧光素骨架,通过引入氟原子和琥珀酰亚胺酯(Succinimidyl Ester)基团增强稳定性与反应活性。

反应活性:琥珀酰亚胺酯基团可与生物分子(如蛋白质、抗体、核酸)的氨基(-NH₂)发生共价偶联,形成稳定的酰胺键。反应需在弱碱性条件(pH 8.0-9.0)下进行,室温孵育1-2小时,后经透析或凝胶过滤纯化。

物理性质:橙色固体,易溶于DMSO,需避光、低温(-15°C以下)保存,避免反复冻融和水解。

2. 光学性能

荧光特性:激发波长496-498 nm,发射波长524-526 nm,发出明亮的绿色荧光。量子产率高,光稳定性优于传统荧光素(如FITC),抗光漂白能力提升约3倍。

pH敏感性:pKa约4.7,在生理pH范围(4-10)内荧光强度波动<5%,对pH变化不敏感,适合复杂生物环境。

光谱兼容性:与FAM、HEX等染料不重叠,支持多重荧光标记(如多色流式细胞术、多通道显微镜)。

3. 应用场景

生物标记:用于蛋白质(如抗体标记)、核酸(如qPCR探针、FISH探针)、细胞表面受体的荧光标记,提升检测灵敏度。

细胞成像:活细胞钙离子检测(如钙成像)、单分子追踪、超分辨成像(PALM/STORM),定位精度达纳米级。

流式细胞术:检测细胞表面标志物、内部生物标志物,或用于细胞分选。

药物开发:偶联药物分子实现荧光引导的递送路径示踪,或用于高通量药物筛选。

钙离子检测:作为钙指示剂,响应钙浓度变化,用于高吞吐量钙测定实验。

4. 合成方法

化学修饰:基于荧光素骨架,通过氟化反应引入氟原子,增强光稳定性和降低pKa。

活化与偶联:羧酸基团通过琥珀酰亚胺酯活化,形成活性中间体,与目标分子的氨基反应。具体步骤包括:

荧光素衍生物的合成与纯化(如HPLC纯化)。

琥珀酰亚胺酯的生成,需在无水条件下进行,避免水解。

偶联反应后,通过透析、凝胶过滤或HPLC纯化,去除未反应染料和副产物。

Oregon green 488 succinimidyl ester

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