Phalloidin, CF 488A ，CF 488A 标记秋水仙素肽的纯化与表征
Phalloidin, CF 488A ，CF 488A 标记秋水仙素肽的纯化与表征
Phalloidin, CF 488A，中文名称可表述为 CF 488A 标记秋水仙素肽，是一种将 CF 488A 荧光染料偶联到 Phalloidin（秋水仙素肽）上的活性分子。Phalloidin 是一种环状肽，能够高度特异性地结合肌动蛋白（F-actin），在结合后可稳定纤维状肌动蛋白结构。CF 488A 是一种绿色荧光染料，吸收峰约在 490 nm，发射峰约在 515 nm，具有高量子产率、良好光稳定性和低背景信号，适合在多色荧光实验中与其他染料组合使用。Phalloidin, CF 488A 的纯化与表征是确保其高活性和荧光性能的关键环节。
纯化过程：
反应偶联
CF 488A 通常以 NHS 酯或类似活性酯形式提供，通过与 Phalloidin 分子上的伯氨基偶联形成稳定的酰胺键。偶联反应在中性或弱碱性缓冲液中进行，温和条件下保证 Phalloidin 的生物活性不受破坏。反应结束后体系中含有未反应的染料、未偶联的 Phalloidin 以及副产物，需要进行纯化处理。初步分离
偶联反应完成后，可通过透析或凝胶过滤柱（如 Sephadex G-25 或类似分子筛柱）去除小分子未反应染料和缓冲盐。此步骤利用分子量差异，将 Phalloidin-CF 488A 与小分子杂质有效分离，保留偶联产物。高效液相色谱纯化
为获得高纯度的 Phalloidin, CF 488A，可采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）进一步纯化。通常使用 C18 色谱柱，流动相为水-乙腈梯度体系，并加入低浓度酸（如三氟乙酸或乙酸）以改善峰形。荧光检测器监测流出峰，对应于 Phalloidin-CF 488A 的吸收和发射特性，可进行收集。HPLC 纯化可以去除未偶联的染料、二聚体或反应副产物，提高产物纯度。冻干处理与储存
纯化后的 Phalloidin, CF 488A 一般冻干保存，以防止水解或光漂白。在避光、低温条件下储存，可长期保持活性。冻干粉末在使用前可溶解于适当缓冲液或水中，直接用于细胞染色或成像实验。
表征方法：
光谱特性
利用紫外-可见光吸收光谱和荧光光谱验证染料偶联情况。CF 488A 标记的 Phalloidin 在吸收光谱中显示 490 nm 左右的吸收峰，在荧光光谱中发射峰约 515 nm。通过比较标记前后染料特性，可以确认荧光染料成功偶联到肽分子上。质谱分析
可通过质谱（MALDI-TOF 或 ESI-MS）测定分子量，验证染料与 Phalloidin 偶联的成功性及偶联比例。理论分子量与实测值一致可证明标记完整。HPLC 分析
纯化后使用 HPLC 检测峰型，可确认产物单一性及杂质含量。偶联产物的保留时间应与标准或参考文献一致。生物功能验证
表征不仅包括化学纯度，还需要确认 Phalloidin-CF 488A 的生物活性。可通过固定细胞或组织样本染色实验，观察 F-actin 标记效果及荧光强度。成功的偶联产物应能特异性结合肌动蛋白纤维，显示清晰荧光信号。
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产品名称：Phalloidin, CF 488A
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研
厂家：良林生物
产品目录
花菁染料CY5.5标记N-乙酰半胱氨酸 CY5.5-N-Acetylcysteine??
花菁染料CY5.5标记O-白黎芦醇 CY5.5-O-ebselen
花菁染料CY5.5标记PD-1抑制剂 CY5.5-PD-1
花菁染料CY5.5标记氨基 Cy5.5-NH2 2097714-44-6
仅用于科研，不能用于人体。小编axc