Phalloidin-AF750，AF750 荧光标记鬼笔环肽的制备方法

Phalloidin-AF750 的中文名称通常为AF750 荧光标记鬼笔环肽，或称为鬼笔环肽-AF750 偶联物。其中，Phalloidin（鬼笔环肽）是一种环状多肽，能够高度选择性地结合并稳定纤维状肌动蛋白（F-actin）；AF750 是一种近红外荧光染料，发射波长约 775 nm，能够在组织样品和细胞成像中减少自发荧光干扰。Phalloidin-AF750 通过化学偶联将荧光染料与鬼笔环肽结合，实现对 F-actin 的可视化标记。

二、制备方法

1. 选择适当的鬼笔环肽衍生物
   制备 Phalloidin-AF750 通常从含有活性官能团（如游离羧基或胺基）的鬼笔环肽衍生物开始。常用的衍生物包括游离氨基的 Phalloidin 或带有特定间隔链（Linker）的修饰 Phalloidin，以便后续偶联。

2. 荧光染料的活化
   AF750 通常以活性形式（如 NHS 酯或异氰酸酯）提供，以便与鬼笔环肽的氨基发生共价偶联。活化过程通常在有机溶剂或缓冲体系中进行，使 AF750 形成可以与蛋白质或肽分子反应的活性中间体。

3. 偶联反应
   将活化后的 AF750 与鬼笔环肽衍生物混合，在温和条件下（室温或略低温，pH 7–8 的缓冲体系）进行偶联反应。反应过程中，AF750 的活性羧基或异氰酸基与 Phalloidin 的氨基形成稳定的共价键。若有间隔链，荧光染料可远离鬼笔环肽主体，减少对 F-actin 结合的干扰。

4. 反应终止与去除副产物
   偶联完成后，通过加入胺类或其他封闭剂终止未反应的活性基团，防止非特异性反应。随后使用透析、凝胶过滤或高效液相色谱（HPLC）去除未偶联的染料、反应副产物及缓冲盐，获得纯化的 Phalloidin-AF750。

5. 纯化与储存
   纯化后的 Phalloidin-AF750 可通过冻干或在适当缓冲液中低温避光储存，保证其结构稳定性和荧光性能。在近红外通道的成像实验中，可直接使用纯化产物标记细胞或组织样品的 F-actin。

三、总结
Phalloidin-AF750（AF750 荧光标记鬼笔环肽）是一种将鬼笔环肽与近红外荧光染料化学偶联的功能化分子。其制备方法包括选择带活性官能团的 Phalloidin 衍生物、活化 AF750 荧光染料、在温和条件下偶联、去除副产物及纯化储存。该偶联物可高效、特异地标记细胞和组织中的 F-actin，适用于免疫荧光、组织成像及多通道荧光实验，为细胞骨架研究和生物成像提供可靠工具。