BDP FL tetrazine，氟化硼二吡咯四嗪的反应体系控制

产品名称：BDP FL tetrazine，氟化硼二吡咯四嗪的反应体系控制

基础反应体系核心参数控制

1. pH 控制（核心区间：6.5~8.5，中性弱碱性为最优）

pH 是影响四嗪活性和 BDP FL 荧光的关键因素，二者最优 pH 高度重合，无需分相调节，精准控制为：

最佳 pH：7.0~7.5（PBS/HEPES 缓冲液常规 pH），此区间四嗪环电子云密度最适，与 TCO 的环加成速率最快，且 BDP FL 荧光量子产率达最大值，信号最稳定。

可耐受区间：6.5~8.5，超出此范围的不可逆影响：

pH＜6.5（酸性）：四嗪环质子化，反应活性下降 50% 以上，BDP FL 荧光强度轻微减弱（约 10%~20%）；

pH＞8.5（强碱性）：四嗪环发生水解开环，不可逆丧失反应活性，同时 BDP FL 的氟化硼骨架易被碱破坏，出现荧光淬灭，且产物无法复原。

缓冲液选择：优先用0.01 mol/L PBS 缓冲液（pH7.2~7.4） 或20~50 mmol/L HEPES 缓冲液（pH7.0~7.5），缓冲能力强、无离子干扰；禁用 Tris 缓冲液（含氨基，会与四嗪发生微弱副反应）、醋酸盐 / 柠檬酸盐缓冲液（pH 偏酸，不适配）。

2. 温度控制（全程室温，严禁升温）

IEDDA 反应为自发热型，且四嗪、BDP FL 均对高温敏感，温度控制需严格遵循：

最佳温度：室温（25℃），无需额外控温，反应速率与荧光稳定性达到平衡。

禁忌：温度＞37℃，会加速四嗪水解、降低反应特异性，同时导致 BDP FL 荧光团光漂白加剧；低温（4℃）会使反应速率下降 80% 以上，仅作为标记极敏感生物分子（如酶、抗体）时的备选，需同步延长反应时间。

3. 反应时间控制（随反应对调整，避免过长 / 过短）

根据所选靶点烯烃精准控制，既保证反应完全，又避免长时间放置导致的荧光衰减：

四嗪 - TCO：室温下0.5~4 h（根据靶点分子量调整），小分子肽段 / TCO 修饰小分子：0.5~1 h；蛋白 / 抗体 / TCO 修饰脂质体：2~4 h。

四嗪 - 降冰片烯：室温下12~24 h，全程密封避光，避免中途开盖。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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