SH-PEG2000-SH,巯基聚乙二醇2000巯基的使用操作要点
产品名称:SH-PEG2000-SH,巯基聚乙二醇2000巯基的使用操作要点
使用操作要点
(一)取用与溶解操作
取用前准备:操作在超净台 / 干燥器中进行,佩戴一次性无粉手套,使用干燥的移液枪头和器皿(玻璃 / 塑料器皿需提前 120℃烘干,冷却后使用,避免水汽残留)。
溶剂选择:优先选用无水惰性有机溶剂或无金属离子的缓冲液,推荐溶剂:无水 DMSO、无水 DMF(溶解性最佳,适配有机相 / 水相反应);水相反应可选用含 EDTA 的 PBS 缓冲液(pH 6.0~7.5),EDTA(0.005~0.01mol/L)可螯合金属离子,抑制巯基氧化二聚。
❌ 禁用溶剂:含水分的普通溶剂、含巯基还原剂的缓冲液(如 DTT、β- 巯基乙醇,会与反应靶点竞争巯基)、高浓度酸 / 碱溶液(pH<5 或 pH>8.5 会加速巯基氧化)。
溶解方法:按终浓度 5~20mg/mL 缓慢溶解,磁力低速搅拌(200~300r/min)或轻摇,避免超声(超声会产生局部高温,导致巯基氧化,且可能断裂 PEG 链),溶解后立即使用,严禁室温放置超过 2h。
(二)反应体系控制
反应 pH 与温度:巯基的特异性反应(如与马来酰亚胺的迈克尔加成、与卤代物的亲核取代)最佳条件为pH 6.5~7.5、室温(25℃);pH<6 时巯基反应活性显著降低,pH>8 时巯基易被空气中的 O₂氧化为二硫键(-S-S-),温度>37℃会加速马来酰亚胺等靶点的水解,同时降低巯基反应特异性。
投料与保护:反应体系需全程通氮气吹扫(排除空气中的 O₂),密封避光反应;SH-PEG2000-SH 与靶点试剂(如 Mal-PEG、纳米材料)的摩尔比建议 1:1~1.2(双巯基为双功能位点,避免过量导致交联团聚)。
反应时间:根据靶点不同控制时间,与马来酰亚胺反应室温 12~24h 即可完全偶联;与卤代物反应可适当延长至 24~48h,无需加热,防止副反应。
(三)后处理操作
纯化时机:反应结束后立即纯化,避免产物在反应体系中继续放置导致巯基未反应端氧化。
纯化方法:根据后续应用选择,水相产物优先用透析法(截留分子量 MWCO=1000,去除游离小分子杂质),4℃避光透析,每 4~6h 换水;有机相产物可用沉淀法(加入 3~5 倍体积无水乙醚 / 正己烷,离心收集沉淀);高纯度要求可采用制备型 HPLC。
产物保存:纯化后的产物需快速冷冻干燥,按原料储存条件保存,若为液体产物,需加入 0.01mol/L EDTA,通氮气密封后 4℃短期存放(≤7d),避免室温储存。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

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