Rhodamine B‑Levan，罗丹明B‑果聚糖的应用

Rhodamine B‑Levan 罗丹明B‑果聚糖，补充别名RB‑Levan、Tetramethylrhodamine‑β‑2,6‑Levan、Rhodamine B‑β‑Levan，是将罗丹明B荧光染料共价接枝于β‑2,6‑果聚糖（Levan）多糖链获得荧光标记多糖探针。果聚糖Levan主要由果糖单元以β‑2,6糖苷键为主链聚合而成，多数来源于微生物发酵，部分植物当中也存在该类型多糖，高分子链拥有大量游离羟基，分子水溶性优秀，同时具备独特的高分子构象，是多糖材料科学重要研究对象。天然Levan多糖无荧光特征，很难直观观测高分子链的扩散、吸附、组装行为，荧光标记成为该多糖体外研究重要工具。

化学标记主要利用果聚糖糖链上分布的羟基，通过羰基二咪唑等活化试剂对羟基位点活化，再与罗丹明B羧基进行缩合，实现染料共价接枝。接枝取代度可以通过调控染料投料比进行调节，取代度过高会造成染料分子密集聚集，引发荧光自淬灭；取代度过低则荧光信号微弱，不利于检测，需要控制合适标记比例。合成结束之后，使用透析膜除去小分子染料杂质，冻干后得到固体标记产物。产物易溶于纯水，低浓度有机溶剂可耐受，高浓度有机溶剂会诱导多糖链析出沉淀。

该标记多糖主要应用于多糖高分子体外示踪方向，借助共聚焦荧光显微技术，观测果聚糖分子在多孔材料内部扩散渗透行为，探究温度、离子强度对β‑2,6果聚糖高分子聚集行为带来的改变。也用于研究果聚糖和凝集素、糖结合蛋白之间识别反应，通过荧光信号变化，评价多糖大分子与蛋白之间相互作用强弱。在复合多糖共混体系当中，可以作为示踪组分，区分果聚糖与其他多糖分子各自分布状态，解析多组分多糖共混之后组装机制。

金属离子、pH条件均会干扰检测信号，弱酸性条件荧光输出*优；体系当中表面活性剂的加入，也会改变多糖高分子构象，间接影响荧光读数。固体样品避光低温保存，水溶液不适合长期储存，建议每次实验前配置新鲜工作液。该标记物全部用于体外多糖材料、糖生物化学基础探究，解析β‑2,6果聚糖高分子各类理化行为特征。

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