DBCO-Cy3 (DBCO-Sulfo-Cy3)的荧光标记方法

DBCO-Cy3 (DBCO-Sulfo-Cy3)的荧光标记方法

DBCO-Cy3 (DBCO-Sulfo-Cy3) 是 Cyanine3 fluorophore 的衍生物，是一种 pH (4-10) 不敏感的橙红色荧光染料 (orange fluorescent dye)，激发波长和发射波长分别为 555nm和 580nm。Sulfo-Cy3 DBCO 反应动力学快，稳定性好，可用于多种标准荧光仪器。DBCO-Cy3 是一种点击化学试剂。它含有 DBCO 基团，可以和含有 Azide 基团的分子发生菌株促进的炔-叠氮环加成反应 (SPAAC)。

DBCO-Cy3荧光标记方法主要基于点击化学的原理，特别是通过无铜点击反应（copper-free click reaction）实现Cy3荧光染料与DBCO（dibenzocyclooctyne）官能团的特异性共轭。这种反应具有高效、快速、无需铜催化剂的特点，适用于生物体内标记和成像。以下是DBCO-Cy3荧光标记方法的一般步骤：

一、实验准备

试剂准备：准备DBCO-Cy3荧光染料、目标蛋白质（或生物分子）、还原剂（如DTT，用于还原蛋白质中的二硫键）、缓冲液等。

设备准备：确保分光光度计、荧光光谱仪、离心机等实验设备处于良好状态。

二、蛋白质处理

蛋白质提取：通过细胞培养、细胞裂解、组织提取等方法获取目标蛋白质。

蛋白质纯化：采用适当的纯化方法（如亲和层析、离子交换层析等）去除蛋白质中的杂质。

浓度测定：使用BCA法、Bradford法等测定纯化后蛋白质的浓度。

三、DBCO连接

还原蛋白质：使用还原剂将蛋白质中的二硫键还原为自由巯基，这有助于后续的DBCO连接。

DBCO修饰：将DBCO官能团通过适当的化学反应（如酰胺化反应）连接到蛋白质分子上。这一步骤可能需要使用DBCO-PEG-NHS等连接剂，通过简单的反应将DBCO引入蛋白质。

四、Cy3荧光标记

染料溶解：将DBCO-Cy3荧光染料溶解在适当的溶剂中（如DMSO）。

荧光标记：将溶解后的DBCO-Cy3荧光染料加入到已经修饰有DBCO的蛋白质溶液中，使染料与DBCO发生点击反应，从而实现荧光标记。反应通常在室温下进行，时间根据实验条件而定，一般在15-60分钟之间。

五、后处理与检测

去除未反应物：使用蛋白质浓缩装置或其他方法去除未反应的染料和连接剂，同时将蛋白质浓缩。

标记效率检测：使用分光光度计或荧光光谱仪测定标记后蛋白质的荧光强度，以评估标记效率。

英文名称：DBCO-Cy3

分子量：983.18

分子式：C50H54N4O11S3

CAS：1782950-79-1

性状：固体

颜色：Purple to purplish red

结构式：

注意事项：

请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。

储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (stored under nitrogen)。-80°C储存时，请在6个月内使用，-20°C储存时，请在1个月内使用。